發(fā)布時(shí)間：2020-07-23 10:55

【摘要】：目的:右心室快速起搏是研究充血性心力衰竭(心衰)機(jī)制的經(jīng)典方法,目前用于制作此類(lèi)模型的多為較大動(dòng)物的心衰模型。心肌細(xì)胞的凋亡是心力衰竭(心衰)的重要原因。本實(shí)驗(yàn)旨在建立快速起搏致心衰大鼠模型及探究微小RNA-499(Micro-RNA 499,MiR-499)在非缺血性心衰中對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響。方法:(1).建立快速起搏致心衰大鼠模型:將30只290-310g雄性健康SD大鼠隨機(jī)分為3組,分別為正常對(duì)照組、假手術(shù)組和起搏組。正常對(duì)照組常規(guī)飼養(yǎng);假手術(shù)及起搏組行起搏器及電極植入術(shù),然后假手術(shù)組常規(guī)飼養(yǎng);起搏組以550次/分持續(xù)快速心室起搏4周。起搏4周后觀(guān)察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一般情況,測(cè)量大鼠自主心率、體重、心臟質(zhì)量,超聲診斷儀檢測(cè)動(dòng)物模型心功能,包括左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)、左室短軸縮短率(LVFS)、左心室收縮末期壓(LVESP)及左心室舒張末期壓(LVEDP)等。(2)構(gòu)建miR-499腺相關(guān)病毒(adeno-associatedvirus,AAV)載體,將后者轉(zhuǎn)染入大鼠體內(nèi),通過(guò)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)使miR-499在大鼠體內(nèi)的表達(dá)上調(diào),選擇40只290-310g雄性健康SD大鼠隨機(jī)分為4組:1.假手術(shù),2.假手術(shù)+miR-499組,3.起搏+空載體組,4.起搏+MiR-499組。假手術(shù)組及起搏組大鼠均行起搏器及電極植入術(shù)(步驟同前),其中上調(diào)MiR-499的組別(第2、4組)大鼠在右心室心尖部縫合電極后,于左心腔內(nèi)注射滴度為1×1012vg/mL病毒200μL,同時(shí)夾閉主動(dòng)脈10秒鐘。使病毒在心臟收縮的基礎(chǔ)上經(jīng)冠狀動(dòng)脈均勻轉(zhuǎn)染至心肌組織,余操作同前。起搏組(3、4組)術(shù)后5天開(kāi)始間斷打開(kāi)起搏器開(kāi)關(guān),術(shù)后7天開(kāi)始以550次/分頻次快速持續(xù)起搏4周,假手術(shù)組(1、2組)不進(jìn)行起搏處理。用qRT-PCR檢測(cè)大鼠體內(nèi)miR-499的表達(dá)水平,用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)大鼠心衰模型中PDCD4和PACS2的含量,用免疫組化及TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡程度。結(jié)果:(1)本實(shí)驗(yàn)建立的心衰動(dòng)物模型均出現(xiàn)活動(dòng)能力下降、食欲減退、呼吸急促等表現(xiàn)。正常對(duì)照組與起搏組相比LVEF分別為83.3%和64.3%(P0.01),LVFS分別為 46.5%和 29.1%(P0.01),LVEDP 分別為 2.4mmHg 和 34.8mmHg(P0.01),自主心率分別377.3次/分和411.6次/分(P0.05),體重分別為502.1g和410.1g(P0.05),心臟質(zhì)量分別為1.18g和1.64g(P0.01)。(2)快速起搏致心衰大鼠模型及rno-miR-499腺相關(guān)病毒載體及空載體構(gòu)建成功,將后者轉(zhuǎn)染入大鼠體內(nèi)后模型體內(nèi)miR-499表達(dá)上調(diào)。結(jié)果表明MiR-499的過(guò)表達(dá)可使大鼠心衰模型心肌組織中PDCD4和PACS2的表達(dá)明顯降低(P0.01)。HE染色可見(jiàn)心臟結(jié)構(gòu)重構(gòu)程度減輕,TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞組織凋亡程度減小(P0.01)。同時(shí),快速起搏可致大鼠心臟出現(xiàn)結(jié)構(gòu)重構(gòu),心肌組織的凋亡程度增加,但MiR-499的過(guò)表達(dá)則使其程度減小。結(jié)論:(1)本實(shí)驗(yàn)成功建立快速起搏致心衰大鼠模型。這種疾病模型可較好的模擬人類(lèi)慢性心衰機(jī)制、心臟結(jié)構(gòu)、血流動(dòng)力學(xué)和一般情況的改變。(2)上調(diào)miR-499可降低PDCD4和PACS2的表達(dá),抑制快速起搏所致心衰大鼠心肌細(xì)胞的凋亡。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R541.6
【圖文】：

圖１邋ＳＤ大鼠起搏器及電極植入過(guò)程示意圖逡逑６．術(shù)后處理：術(shù)后３天在大鼠胸腹部放置防咬圈，斷裂，隔日拆卸防咬圈觀(guān)察；假手術(shù)組和起搏組術(shù)后每７天；起搏組于術(shù)后５天開(kāi)始間斷打開(kāi)起搏器開(kāi)關(guān)起搏快速起搏（起搏頻率為５５０次／分），持續(xù)起搏４周。逡逑７．術(shù)后觀(guān)察：逡逑１）觀(guān)察各組飲食、睡眠、活動(dòng)、毛發(fā)色澤、體重等２）心臟超聲檢查：停止起搏后，３％戊巴比妥鈉４０ｍｇ／ｐｅｒｍｉｎｕｔｅ，ｂｐｍ），用超聲心動(dòng)儀測(cè)定左室射血分?jǐn)?shù)（Ｌ（ＬＶＦＳ，％）。逡逑３）采用多道生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)檢測(cè)：麻醉下經(jīng)

■邐■逡逑假手術(shù)組（Ｓ組）邐起搏組（Ｐ組）逡逑圖３．ａ假手術(shù)組及起搏組Ｍａｓｓｏｎ染色縱切面對(duì)比圖（放大倍數(shù)：４００）逡逑ｍｍ逡逑假手術(shù)組（Ｓ組）邐起搏組（Ｐ組）逡逑圖３．ｂ假手

圖３．ａ假手術(shù)組及起搏組Ｍａｓｓｏｎ染色縱切面對(duì)比圖（放大倍數(shù)：４００）逡逑

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 孟凡磊;王超;霍曉川;關(guān)寧;羅俊生;;miR-146a促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成調(diào)控機(jī)制研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年08期

2 毋健;趙婷;商志娟;叢濤;孫穎慧;王珂;;快速右室起搏犬心臟整體及局部心肌功能的變化[J];山東醫(yī)藥;2013年13期

本文編號(hào)：2767230