【摘要】：缺血性心臟病主要由于冠狀動脈粥樣硬化導致血管狹窄或堵塞,從而引起心臟缺血和下游組織缺氧。其中缺氧是一種存在于多種心血管疾病中的病理特征,在介導心臟重構和心臟細胞的多種生物學功能方面起到重要作用,特別是缺氧能夠廣泛促進心臟中細胞的凋亡。目前,大多數(shù)研究都關注心肌細胞的凋亡,對心臟成纖維細胞(cardiac fibroblast,CF)凋亡的報道較少。然而,CF是心肌修復的關鍵因素,可以產生膠原蛋白,提高心臟的拉伸強度。纖維化修復受到破壞則會導致心臟壁拉伸強度降低。但損傷后CF的持久存在則會導致瘢痕、不良重塑、心肌肥大、心律失常、心力衰竭等。因此尋找抑制成熟期CF凋亡的機制研究能夠為損傷后的修復提供了理論依據(jù)和分子靶標。鈣調蛋白(Calmodulin,CaM)是一種17 KDa的鈣結合蛋白,在真核細胞中廣泛存在。CaM能夠通過結合包括激酶、磷酸酶、離子通道、轉錄因子等許多靶蛋白,從而調節(jié)細胞興奮-收縮耦聯(lián)、參與心率失常相關信號轉導等;而CaM過度活化會導致心力衰竭、心肌肥大等。因此,CaM在人體尤其是心臟中至關重要。而關于CaM在CF中作用的研究較少,尚不清楚在缺氧條件下CaM對于CF的作用以及機制。鑒于鞘氨醇磷酸膽堿(Sphingosylphosphorylcholine,SPC)具有廣譜的抑凋亡功能,也具有廣泛的促自噬作用;本實驗室之前的研究結果顯示SPC能夠通過促進缺血模型下心肌細胞的自噬從而抑制凋亡,而且,CaM是SPC的一種受體。因此我們擬對CaM在缺氧誘導CF自噬與凋亡中分子機制以及SPC在CF中是否具有與心肌細胞同樣的作用等問題進行初步研究。結果顯示,缺氧處理誘導CF的凋亡,用SPC處理缺氧條件下的CF,能夠促進CF自噬,作用的靶點發(fā)生在自噬流。同時,SPC具有抑制CF凋亡的功能,說明在缺氧條件下SPC可能通過促進CF自噬的方式,避免細胞進入凋亡途徑,從而抑制CF凋亡的發(fā)生。利用siRNA干擾技術,建立了干擾CaM表達的實驗體系。發(fā)現(xiàn)干擾CaM的表達或抑制它的功能都可以增加CF的自噬而抑制其凋亡,說明CaM在CF的自噬和凋亡過程中發(fā)揮作用;SPC的功能與CaM抑制劑三氟拉嗪(Trifluoperazine,TFP)類似,同時添加SPC和TFP有疊加的效果;而SPC與Ca2+-ATPase抑制劑(能夠導致細胞內Ca2+濃度升高)TG的作用相反,說明SPC通過CaM參與了對CF自噬和凋亡的調控過程。進一步研究發(fā)現(xiàn),缺氧處理會引起CF中p38和STAT3磷酸化水平增加,SPC處理CF可抑制此過程,同時伴隨著對CF凋亡的抑制。用p38抑制劑SB 253080、STAT3的抑制劑stattic以及STAT3的激動劑TFA進行平行實驗,均證明了上述結果。由此說明,SPC可通過抑制p38/STAT3的磷酸化從而抑制缺氧誘導的CF凋亡。另外,CaM受抑制后,p38和STAT3的磷酸化水平也下降。綜合以上結果,我們認為SPC可能通過其受體CaM調節(jié)p38和STAT3的磷酸化,從而直接或通過增強自噬來抑制缺血條件下CF凋亡。SPC對CF細胞和心肌細胞作用的同質性,為研究和將來治療缺血性心血管疾病提供了較好的材料,SPC對CF細胞具有的增強自噬、抑制凋亡方面的功能,也為研究心血管疾病發(fā)生后心臟重塑的分子機制提供了思路。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R541
【圖文】：

圖２邋ＳＰＣ抑制缺氧誘導的ＣＦ凋亡。（Ａ）分別用１、５、１０邋ｐＭ邋ＳＰＣ處理ＣＦ，移逡逑入三氣培養(yǎng)箱中缺氧４邋ｈ，普通光學顯微鏡下觀察ＣＦ形態(tài)學變化并拍照。（Ｂ）逡逑將ＣＦ按照Ａ的方法處理，Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ檢測ＰＡＲＰ１和ｃａｓｐａｓｅ３切割水平的變化。逡逑（Ｃ）按照Ａ方法處理后的細胞進行Ｈｏｅｃｈｓｔ邋３３２５８染色，使用熒光顯微鏡拍照。逡逑Ｎｏｒ為正常條件培養(yǎng)組，Ｃｔｒ為缺氧對照組。＊Ｐ＜０．０５；邋＊＊Ｐ＜０．０１；邋＊＊＊Ｐ＜０．００１。逡逑ｎ＝３0逡逑

邋ＳＰＣ促進ＣＦ自噬。（Ａ）分別用１、５、１０邋ｈＭ邋ＳＰＣ處理，移入三氣培養(yǎng)氧４邋１１，提蛋白使用”６切６１１１５１0１檢測１＾：３－１１表達的變化。（８）使用３－＾１八）邋ＢａｆＡｌ和ＳＰＣ共同處理，之后進行缺氧處理，Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ檢測ＬＣ３－ＩＩ變化。ｖｅｈｉｃｌｅ邋均為溶劑對照。＊Ｐ＜０．０５；邋＊＊Ｐ＜０．０１；邋＊＊＊Ｐ＜０．００１。ｎ＝３。逡逑

圖４抑制ＣａＭ能夠抑制缺氧誘導的ＣＦ凋亡。（Ａ）分別使用２０、４０、６０、８０邋ｎＭ逡逑的ＣａＭ邋ｓｉＲＮＡ處理ＣＦ，Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ檢測ＣａＭ的表達量。（Ｂ）分別使用ＣａＭ逡逑的ｓｉＲＮＡ和ＳＰＣ共同處理，缺氧處理４邋ｈ，Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ檢測ＰＡＲＰ１和ｃａｓｐａｓｅ３逡逑切割水平的變化。（Ｃ）使用ＣａＭ的ｓｉＲＮＡ和ＳＰＣ共同處理之后用Ｈｏｅｃｈｓｔ邋３３２５８逡逑染色，熒光顯微鏡下觀察拍照。ｓｉＣ為ＣａＭ的ｓｉＲＮＡ，ｖｅｈｉｃｌｅ均為溶劑對照，逡逑ｎｅｇ邋為陰性對照。叩＜０．０５；邋＊叩＜０．０１；邋Ｍ＋ＰｃＯ．ＯＯｌ。ｎ＝３。逡逑

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 沈滌非;吳青青;鄧偉;倪健;唐其柱;;參松養(yǎng)心粉劑對轉化生成因子誘導的心臟成纖維細胞激活的影響[J];武漢大學學報(醫(yī)學版);2017年02期

2 劉一劍;桂慶軍;;論述心臟成纖維細胞在心肌纖維化中的作用[J];人人健康;2017年01期

3 李小麗;黃愷;黃丹;楊崇哲;姚蘭;廖玉華;;多聚二磷酸腺苷核糖合成酶抑制劑對血管緊張素Ⅱ誘導心臟成纖維細胞基質金屬蛋白酶表達的影響[J];臨床心血管病雜志;2008年03期

4 丁秀云,劉謨焓,王琳,王士雯;D-半乳糖對幼鼠心臟成纖維細胞擬衰老作用的實驗研究[J];中國病理生理雜志;2004年08期

5 杜昕,易宗春,辛華雯,戴閨柱;血管緊張素Ⅱ和醛固酮對培養(yǎng)鼠心臟成纖維細胞Bcl-2蛋白表達的影響[J];中華老年心腦血管病雜志;2000年03期

6 常煜胤;路明;盧太苓;丁潔;;川芎嗪對血管緊張素Ⅱ誘導大鼠心臟成纖維細胞纖維化的影響[J];中西醫(yī)結合心腦血管病雜志;2016年23期

7 凡棟;李麗;王程;崔曉兵;周允;吳立玲;;脂聯(lián)素誘導大鼠心臟成纖維細胞產生IL-6的機制研究[J];中國病理生理雜志;2010年10期

8 黃丹;黃愷;王妍;楊崇哲;李小麗;廖玉華;;1型多聚二磷酸腺苷核糖合成酶對去甲腎上腺素誘導心臟成纖維細胞表達基質金屬蛋白酶的影響[J];臨床心血管病雜志;2008年09期

9 史承勇;王波;郭顯;刁繁榮;余慧;趙仙先;;鞘鞍醇激酶-2在轉化生長因子-β1誘導心臟成纖維細胞增殖與活化過程中作用[J];臨床軍醫(yī)雜志;2019年05期

10 朱錦星;凌望;程大雁;吳美平;;中藥干預心臟成纖維細胞活化防治心肌纖維化研究進展[J];時珍國醫(yī)國藥;2018年08期

相關會議論文 前10條

1 黃丹;黃愷;李小麗;王妍;楊崇哲;姚蘭;廖玉華;;1型多聚二磷酸腺苷核糖合成酶調節(jié)心臟成纖維細胞基質金屬蛋白酶及其組織抑制因子表達的機制[A];中華醫(yī)學會第11次心血管病學術會議論文摘要集[C];2009年

2 凡棟;李麗;王程;吳立玲;;脂聯(lián)素促進成年大鼠心臟成纖維細胞產生白介素6[A];第七屆海峽兩岸心血管科學研討會論文集[C];2009年

3 朱嘉寶;李淑琴;武宇洲;馬千里;;siRNA反向轉染法在大鼠心臟成纖維細胞的研究[A];中華醫(yī)學會第十五次全國心血管病學大會論文匯編[C];2013年

4 周法光;吳可貴;林明;王向宇;許昌生;王華軍;;血管緊張素轉換酶反義cDNA對心臟成纖維細胞膠原合成的抑制作用[A];中國病理生理學會動脈粥樣硬化專業(yè)委員會五屆一次會議論文集[C];2002年

5 凡棟;李麗;王程;崔曉兵;周允;吳立玲;;脂聯(lián)素誘導大鼠心臟成纖維細胞產生IL-6的機制研究[A];中國病理生理學會第九屆全國代表大會及學術會議論文摘要[C];2010年

6 李麗;凡棟;王程;吳立玲;;血管緊張素Ⅱ促進periostin表達的信號轉導通路研究[A];第七屆海峽兩岸心血管科學研討會論文集[C];2009年

7 尚福軍;趙連友;鄭強蓀;薛玉生;;鈣調神經磷酸酶調控血管升壓素誘導大鼠心臟成纖維細胞膠原合成的作用[A];中華醫(yī)學會心血管病學分會第八次全國心血管病學術會議匯編[C];2006年

8 李辭霞;常玉巧;郭志坤;;新生大鼠心臟成纖維細胞體外分裂方式[A];中國解剖學會2015年年會論文文摘匯編[C];2015年

9 韓毅;龔燦生;胡燕;金滿文;;五甲基槲皮素抑制醛固酮對乳鼠心臟成纖維細胞的作用[A];2008心血管藥理學術研討會論文匯編[C];2008年

10 李麗;凡棟;王程;吳丹;崔曉兵;吳立玲;;血管緊張素Ⅱ促進心臟成纖維細胞periostin的表達[A];中國病理生理學會第九屆全國代表大會及學術會議論文摘要[C];2010年

相關重要報紙文章 前2條

1 記者 常麗君;人類心臟成纖維細胞可轉化為心肌細胞[N];科技日報;2013年

2 記者　應洪舒;β2-AR通過非經典路徑介導IL-6生成[N];中國醫(yī)藥報;2006年

相關博士學位論文 前10條

1 李愛國;阿伐他汀調控SHR心臟成纖維細胞MMPs/TIMPs和NF-κB表達及其與心臟重塑關系的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2004年

2 嚴俊;缺氧時大鼠心臟成纖維細胞與細胞外基質相互作用及機制的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2005年

3 武宇洲;阿托伐他汀和普伐他汀對醛固酮誘導心臟成纖維細胞ET-1/ET-AR和TGF-β1/TGF-βRⅠ系統(tǒng)表達的影響及其信號轉導機制的研究[D];河北醫(yī)科大學;2007年

4 聶凌;磷酸酶與張力蛋白同源物PTEN在心肌細胞外基質重構中作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2007年

5 郭曉綱;咪達普利拉對白介素-1β誘導的心臟成纖維細胞基質金屬蛋白酶-2和抑制劑-2的作用及其機理研究[D];浙江大學;2008年

6 楊蓉;Visfatin在高糖環(huán)境下新生大鼠心臟細胞中的表達調節(jié)[D];河北醫(yī)科大學;2012年

7 王亞玲;醛固酮通過Rho/ROCK/JNK通路上調心臟成纖維細胞趨化素的表達及分子機制[D];河北醫(yī)科大學;2017年

8 吳敏;E2F1通過下調VEGF和PLGF的基因表達抑制心臟新生血管形成[D];華中科技大學;2011年

9 陳攀攀;缺氧預處理的骨毮間充質干細胞通過瘦素抑制心臟成纖維細胞活化和膠原合成[D];浙江大學;2016年

10 王玨;MicroRNA-24調控心肌梗死后纖維化過程的實驗研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2012年

相關碩士學位論文 前10條

1 齊琦;鈣調蛋白在缺氧誘導心臟成纖維細胞自噬與凋亡中分子機制研究[D];山東大學;2019年

2 周繼明;生長分化因子15在急性心肌梗死中的功能及分子機制研究[D];中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學;2018年

3 張艷菊;Periostin在高糖誘導乳鼠心臟成纖維細胞的表達及纈沙坦的干預作用[D];青島大學;2018年

4 吳美玲;17β-雌二醇對容量負荷性心功能障礙和心臟成纖維細胞分化的影響及其信號調控機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2008年

5 趙慧;葡萄糖和醛固酮對心臟成纖維細胞增殖的影響[D];河北醫(yī)科大學;2010年

6 杜雷;重組9型腺相關病毒轉染大鼠心臟成纖維細胞及對NF-κB通路的影響[D];新疆醫(yī)科大學;2010年

7 李安安;過氧化物酶體增殖物激活受體對心肌細胞外基質重構的炎癥機制研究[D];山東大學;2006年

8 張培培;高遷移率族蛋白B-1對心臟成纖維細胞的作用及信號通路研究[D];復旦大學;2014年

9 孫義潤;活化的心臟成纖維細胞TRPC通道的表達及意義[D];皖南醫(yī)學院;2016年

10 牛歡;堿性成纖維細胞生長因子調節(jié)大鼠心臟成纖維細胞β-catenin的表達[D];蘭州大學;2010年

本文編號：2759000