發(fā)布時間：2020-07-16 21:27

【摘要】：低密度脂蛋白(LDL)是人體內(nèi)將膽固醇從肝臟運往外周組織和細(xì)胞的主要載體,也是導(dǎo)致動脈粥樣硬化疾病的首要危險因素。目前對于LDL結(jié)構(gòu)的研究,大多是使用X衍射、小角度散射和透射電子顯微鏡等技術(shù)表征LDL中主要載脂蛋白的結(jié)構(gòu),但這些研究方法普遍存在著忽視LDL生理環(huán)境或組成成分的缺陷,因而并沒有形成統(tǒng)一的觀點。關(guān)于LDL結(jié)構(gòu)的研究,未來主要的挑戰(zhàn)是闡明LDL上的載脂蛋白和脂質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)特征以及它們之間的相互作用,而對LDL進(jìn)行脂質(zhì)剔除也許是探究LDL脂質(zhì)成分與蛋白結(jié)構(gòu)之間的相互作用的突破口。乙基苯基聚乙二醇(NP-40)和甲基-β-環(huán)糊精(MβCD)是生物學(xué)研究中常用的兩種溫和的脂質(zhì)剔除試劑,能夠以不同方式去除細(xì)胞等生物學(xué)結(jié)構(gòu)上的脂質(zhì),但是它們能否去除LDL上的脂質(zhì)及其對LDL的具體影響并不清楚。本實驗采取LDL作為研究對象并使用不同濃度的NP-40和MβCD對其進(jìn)行處理。使用X射線衍射能譜儀、瓊脂糖凝膠電泳、全自動生化儀、Zeta粒度儀和原子力顯微鏡等多種儀器和方法檢測NP-40和MβCD對LDL的脂質(zhì)組成、形貌結(jié)構(gòu)以及物理化學(xué)性質(zhì)影響,通過比較分析發(fā)現(xiàn):適宜濃度的NP-40和MβCD均能夠造成LDL脂質(zhì)成分和蛋白成分相分離的現(xiàn)象,但是經(jīng)40-80 mM的MβCD處理分離出的載脂蛋白的電荷性質(zhì)與天然狀態(tài)更為接近;LDL經(jīng)0.64%NP-40的溶解作用和100 mM MβCD的剔除作用后分別暴露出載脂蛋白的環(huán)狀和球狀結(jié)構(gòu)形式;但是MβCD具有更高的膽固醇剔除率(92%)和更低的甘油三酯剔除率(58%)。研究結(jié)果表明NP-40和MβCD均能夠剔除LDL的脂質(zhì)成分,LDL的蛋白結(jié)構(gòu)和LDL脂質(zhì)成分的損失程度相關(guān)。另外,本實驗表明了原子力顯微鏡成像技術(shù)和NP-40處理相結(jié)合能夠在生理狀態(tài)下檢測脂蛋白的結(jié)構(gòu),瓊脂糖凝膠電泳和MβCD處理相結(jié)合能夠從LDL中分離出與天然狀態(tài)更為接近的載脂蛋白,將為未來的研究提供新的技術(shù)方法。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R543.5
【圖文】：

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圖 2.2 LDL 脂質(zhì)剔除率Figure 2.2 percent of lipids depletion圖 2.4 是 LDL 脂質(zhì)剔除率統(tǒng)計圖，其中圖 A、圖 B、圖 C 分別代表 NP-剔除 LDL 中甘油三酯（TG）、膽固醇(TCH) 、磷脂(PL)的剔除率；圖 D、圖 E圖 F 分別代表 MβCD 剔除 LDL 中甘油三酯（TG）、膽固醇(TCH) 、磷脂(PL)剔除率。從圖中可以看出 NP-40 和 MβCD 均可以將脂質(zhì)從 LDL 中剔除出去而TCH、TG、PL 的剔除率和濃度呈正相關(guān)。當(dāng) NP-40 處理 LDL 的濃度達(dá)到 0.16時能夠顯著性地剔除 LDL 的 TG 成分；當(dāng) NP-40 處理 LDL 的濃度達(dá)到 0.08%能夠顯著性地剔除 LDL 的 TCH 和 PL 成分；當(dāng) NP-40 處理 LDL 的濃度達(dá)到 1時能夠剔除 LDL 大約 80%的 TCH、TG 和 PL。當(dāng) MβCD 濃度達(dá)到 10mM 時，能夠顯著性地剔除 LDL 的 PL、TCH 成分，MβCD 處理 LDL 的濃度達(dá)到 20 mM 時，能夠顯著性地剔除 LDL 的 TG 成分。MβCD 濃度達(dá)到 100 mM 時，能夠剔除 LDL 中 90%的 PL、TCH 和 50% 的 TG為了更直觀的表現(xiàn)同一濃度的 NP-40 和 MβCD 對 LDL 脂質(zhì)成分總體效的影響，我們利用 Graphpad Prism 將數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總分析

圖 2.2 LDL 脂質(zhì)剔除率Figure 2.2 percent of lipids depletion圖 2.4 是 LDL 脂質(zhì)剔除率統(tǒng)計圖，其中圖 A、圖 B、圖 C 分別代表 NP-40剔除 LDL 中甘油三酯（TG）、膽固醇(TCH) 、磷脂(PL)的剔除率；圖 D、圖 E、圖 F 分別代表 MβCD 剔除 LDL 中甘油三酯（TG）、膽固醇(TCH) 、磷脂(PL)的剔除率。從圖中可以看出 NP-40 和 MβCD 均可以將脂質(zhì)從 LDL 中剔除出去而且TCH、TG、PL 的剔除率和濃度呈正相關(guān)。當(dāng) NP-40 處理 LDL 的濃度達(dá)到 0.16%時能夠顯著性地剔除 LDL 的 TG 成分；當(dāng) NP-40 處理 LDL 的濃度達(dá)到 0.08%時能夠顯著性地剔除 LDL 的 TCH 和 PL 成分；當(dāng) NP-40 處理 LDL 的濃度達(dá)到 1%時能夠剔除 LDL 大約 80%的 TCH、TG 和 PL。當(dāng) MβCD 濃度達(dá)到 10mM 時，能夠顯著性地剔除 LDL 的 PL、TCH 成分，當(dāng)MβCD 處理 LDL 的濃度達(dá)到 20 mM 時，能夠顯著性地剔除 LDL 的 TG 成分。當(dāng)MβCD 濃度達(dá)到 100 mM 時，能夠剔除 LDL 中 90%的 PL、TCH 和 50% 的 TG。為了更直觀的表現(xiàn)同一濃度的 NP-40 和 MβCD 對 LDL 脂質(zhì)成分總體效果的影響，我們利用 Graphpad Prism 將數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總分析

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本文編號：2758530