【摘要】：第1章引言我們假設(shè)RhoE可通過調(diào)控NF-κB信號,在心肌梗死中發(fā)揮心肌保護(hù)作用。本研究以RhoE為基點(diǎn),建立RhoE單倍不足和過表達(dá)小鼠,在明確基因工程小鼠構(gòu)建成功的基礎(chǔ)上,建立小鼠在體MI模型,從炎癥、梗死面積、心功能和生存率等角度觀察不同表達(dá)量RhoE對MI后小鼠心臟的影響;之后通過在體MI模型和成年小鼠心肌細(xì)胞分離和培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),觀察RhoE與NF-κB信號的相互影響;通過以上實(shí)驗(yàn)闡明RhoE與NF-κB信號串?dāng)_在MI中的保護(hù)作用機(jī)制,為CVD的治療提供科學(xué)依據(jù)和理論支持。第2章RhoE缺陷對心肌梗死的影響目的:探討RhoE缺陷對小鼠MI后炎癥、梗死面積、心功能和生存率的影響。方法:構(gòu)建RhoE單倍不足小鼠,建立小鼠在體MI模型,于術(shù)后第3天使用Western blotting檢測心臟中RhoE蛋白水平、炎癥細(xì)胞標(biāo)志物,qRT-PCR檢測炎癥因子水平,TTC染色檢測心肌梗死面積大小,超聲檢測心臟EF值;觀察MI術(shù)后1周內(nèi)小鼠生存率。結(jié)果:RhoE缺陷小鼠心臟中RhoE蛋白表達(dá)量明顯降低,RhoE缺陷促使MI后心肌中F4/80、Ly-6G表達(dá)量明顯升高,心肌中IL-1β、TNF-α、MMP2和MMP9基因mRNA水平明升高,心肌梗死面積擴(kuò)大,心臟EF值降低,MI后1周小鼠生存率更低。小結(jié):RhoE缺陷可加劇MI后心肌炎癥,擴(kuò)大梗死面積,降低心功能和短期生存率。第3章RhoE過表達(dá)對心肌梗死的保護(hù)作用目的:探討RhoE過表達(dá)對小鼠MI后炎癥、梗死面積、心功能和生存率的影響。方法:構(gòu)建心臟特異性RhoE轉(zhuǎn)基因小鼠,建立小鼠在體MI模型,于術(shù)后第3天使用Western blotting檢測心臟中RhoE蛋白水平、炎癥細(xì)胞標(biāo)志物,qRT-PCR檢測炎癥因子水平,TTC染色檢測心肌梗死面積大小,超聲檢測心臟EF值;觀察MI術(shù)后1周內(nèi)小鼠生存率。結(jié)果:RhoE轉(zhuǎn)基因小鼠心臟中RhoE蛋白表達(dá)量明顯升高,RhoE過表達(dá)使MI后心肌中F4/80、Ly-6G表達(dá)量明顯降低,心肌中IL-1β、TNF-α、MMP2和MMP9基因mRNA水平明降低,心肌梗死面積縮小,心臟EF值升高,MI后1周小鼠生存率與WT組相近。小結(jié):RhoE具有內(nèi)源性心肌保護(hù)作用,RhoE過表達(dá)可減輕MI后心肌損傷、減輕炎癥,縮小梗死面積,保護(hù)心功能,并提高M(jìn)I后小鼠的短期生存率。第4章心肌梗死中,RhoE負(fù)調(diào)控NF-κB活化發(fā)揮心肌保護(hù)作用目的:體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探討RhoE對NF-κB信號活化的影響。方法:在RhoE缺陷和過表達(dá)小鼠體內(nèi)建立MI模型,于術(shù)后第3天,Western blotting檢測細(xì)胞核p65和p50表達(dá)量;從RhoE缺陷和過表達(dá)小鼠心臟中分離心肌細(xì)胞,使用TNF-α刺激培養(yǎng)的心肌細(xì)胞,Western blotting檢測細(xì)胞核p65和p50表達(dá)量。結(jié)果:RhoE缺陷小鼠MI模型中,細(xì)胞核p65和p50表達(dá)量顯著升高,而RhoE過表達(dá)后,細(xì)胞核p65和p50表達(dá)量明顯降低;在有/無TNF-α刺激的心肌細(xì)胞中,RhoE缺陷均促進(jìn)了細(xì)胞核p65和p50表達(dá)量的顯著升高,而RhoE過表達(dá)后顯著降低了核p65和p50表達(dá)量。小結(jié):RhoE可直接抑制NF-κB信號中p50和p65蛋白核轉(zhuǎn)位,負(fù)調(diào)控NF-κB信號活化,對抗炎癥,發(fā)揮心肌保護(hù)作用。第5章結(jié)論結(jié)論:RhoE在心肌梗死損傷中具有內(nèi)源性心肌保護(hù)作用,可提高M(jìn)I后小鼠的生存率;RhoE可能直接負(fù)調(diào)控NF-κB信號活化,減少NF-κB蛋白核轉(zhuǎn)位,抑制炎癥,縮小梗死面積,增強(qiáng)心功能,減輕MI損傷。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R542.22

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本文編號：2732569