【摘要】：血管內(nèi)皮細(xì)胞在調(diào)節(jié)血管壁順應(yīng)性,調(diào)控血管內(nèi)皮功能穩(wěn)態(tài)的過程中發(fā)揮重要作用。在肥胖、糖尿病及高血壓等慢性心血管疾病中,均伴隨著血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷,而血管內(nèi)皮損傷往往與細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的穩(wěn)態(tài)失衡有關(guān)。因此,從血管內(nèi)皮細(xì)胞ROS穩(wěn)態(tài)調(diào)控的角度出發(fā),改善血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷,為有效干預(yù)因血管內(nèi)皮損傷而導(dǎo)致的血管功能穩(wěn)態(tài)失衡提供新的治療思路和方法。本文首先從小鼠的血管內(nèi)皮細(xì)胞入手,利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和免疫印跡分析(Western blotting)等方法證明了內(nèi)皮細(xì)胞中瞬時(shí)感受器電位通道4(TRPV4)和Nox2的存在,并利用免疫共沉淀(co-IP)和免疫熒光共振能量轉(zhuǎn)移(Immuno-FRET)實(shí)驗(yàn)證明了TRPV4和Nox2在細(xì)胞中的分布及物理耦聯(lián)。其次,我們誘導(dǎo)了高脂細(xì)胞模型(FFA),證明了該模型中TRPV4-Nox2復(fù)合體物理耦聯(lián)的增多,利用二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)和Mito-SOX熒光探針標(biāo)記內(nèi)皮細(xì)胞中的ROS,結(jié)果發(fā)現(xiàn)ROS產(chǎn)生顯著增加;其次,免疫印跡結(jié)果顯示血管內(nèi)皮鈣粘連蛋白VE-cadherin表達(dá)下調(diào),而炎癥介導(dǎo)的細(xì)胞間粘附分子ICAM-1表達(dá)上調(diào);并且,利用鬼筆環(huán)肽(Phallotoxins)標(biāo)記的骨架蛋白F-actin發(fā)生明顯重構(gòu)、細(xì)胞通透性的顯著增加;最后利用線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒檢測(cè)到線粒體膜電位明顯下降。以上結(jié)果證明FFA細(xì)胞模型中TRPV4-Nox2復(fù)合體顯著增多,導(dǎo)致了細(xì)胞中ROS的穩(wěn)態(tài)失衡,進(jìn)一步引起細(xì)胞通透性增加,血管內(nèi)皮功能紊亂等,而TRPV4抑制劑和Nox2抑制劑又可以逆轉(zhuǎn)上述現(xiàn)象。最后,在動(dòng)物水平上,我們利用TRPV4-WT野生型小鼠和TRPV4-KO敲除型小鼠,誘導(dǎo)高脂飲食肥胖(DIO)模型小鼠,通過Immuno-FRET實(shí)驗(yàn)證明DIO模型小鼠中TRPV4-Nox2復(fù)合體耦聯(lián)增多;其次,利用二氫乙啶(Dihydroethidium,DHE)熒光探針進(jìn)行小鼠血管原位(en face)標(biāo)記ROS;最后利用Phallotoxins標(biāo)記血管中的F-actin,以及利用1%伊文斯藍(lán)染料進(jìn)行Miles Assay血管通透實(shí)驗(yàn)等,上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明TRPV4-Nox2復(fù)合體的增加導(dǎo)致小鼠血管內(nèi)皮ROS的增加,ROS的穩(wěn)態(tài)失衡進(jìn)一步使血管通透性增加等血管功能紊亂。綜上,本文證明,血管內(nèi)皮細(xì)胞中TRPV4和Nox2的存在及其耦聯(lián),在肥胖病理模型下,TRPV4-Nox2復(fù)合體的增加可以介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生增多,并且最終導(dǎo)致血管內(nèi)皮的通透性顯著增加等血管功能紊亂的現(xiàn)象。因此,可以把TRPV4-Nox2復(fù)合體作為靶點(diǎn),以調(diào)整血管ROS穩(wěn)態(tài)失衡為目標(biāo),為肥胖等心血管疾病導(dǎo)致的血管功能穩(wěn)態(tài)失衡提供新思路。
【圖文】：

江南大學(xué)碩士學(xué)位論文[12,13]。與電壓門控離子通道不同的是，TRP 離子通道在第四個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域的電壓傳感器[11]，因此不受電壓門控，但可以感受其他例如氧化應(yīng)激、脂肥大信號(hào)、炎癥產(chǎn)物和機(jī)械拉伸等各種刺激。大部分的 TRP 離子通道是，但是TRPV5和TRPV6是有高度Ca2+選擇性的[13,14]，而通道激酶TRPM6和以透過 Mg2+和 Zn2+等其他金屬離子。研究已知胞內(nèi) Ca2+水平是啟動(dòng)信號(hào)鍵因素，在調(diào)節(jié)離子穩(wěn)態(tài)的各種離子通道中，，瞬時(shí)受體電位(TRP)通道是鍵的 Ca2+信號(hào)通路，所以它可以作為多種血管信號(hào)傳導(dǎo)的主要介質(zhì)存在。物理或化學(xué)刺激，TRP 離子通道可以通過 Ca2+進(jìn)入或膜去極化來將信號(hào)傳信號(hào)通路。TRP 通道涉及細(xì)胞功能的多個(gè)方面，例如血管平滑肌細(xì)胞中的道參與調(diào)節(jié)收縮和增殖，而血管內(nèi)皮細(xì)胞中的 TRP 離子通道則可以調(diào)節(jié)血管舒張、血管壁滲透性和血管生成等[15]。

TRPV4結(jié)構(gòu)
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R54

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 王春;秦少博;李萍;;炎癥與血管內(nèi)皮損傷研究進(jìn)展[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2015年01期

2 韓曉燕;高麗萍;劉箐;;NOX家族蛋白的研究進(jìn)展[J];生命科學(xué);2012年06期

本文編號(hào)：2698673