【摘要】：研究背景:動(dòng)脈粥樣硬化性下肢缺血是老齡化社會的常見病,多發(fā)病,下肢缺血性疾病是嚴(yán)重威脅人們身體健康的一類疾病,輕者出現(xiàn)間歇性跋行,影響正常的工作和學(xué)習(xí),重者截肢,甚至威脅人的生命。血管新生和炎癥反應(yīng)為下肢缺血患者轉(zhuǎn)歸的重要因素,免疫蛋白酶體對T細(xì)胞的分化、炎性因子分泌等過程具有重要的調(diào)節(jié)作用,以β5i亞單位作用為主,但β5i亞單位是否參與了下肢缺血疾病的血管新生,目前尚無報(bào)道。目的:明確免疫蛋白酶體亞單位β5i在小鼠下肢缺血中的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究。實(shí)驗(yàn)方法:取雄性ApoE-/-小鼠制備下肢缺血模型。實(shí)驗(yàn)分為4組:ApoE-/-組(ApoE-/-),ApoE-/-手術(shù)組(ApoE-/--OP),β5i 基因敲除的 ApoE-/-組(DKO 組),β5i基因敲除的ApoE-/-手術(shù)組(DKO-OP組)。激光超聲多普勒進(jìn)行手術(shù)成功率及術(shù)后血流灌注的監(jiān)測。Western Blot方法分析β5i在下肢缺血組織中的表達(dá)水平。并通過HE染色觀察各組小鼠炎癥變化和血管重塑情況。Western Blot方法測定肌肉內(nèi)VEGF的表達(dá)。免疫組織化學(xué)測定側(cè)枝血管新生。結(jié)果:1、股動(dòng)脈結(jié)扎是制備小鼠下肢缺血性模型的有效方法;2、ApoE-/--OP組組織中免疫亞單位β5i表達(dá)及活性較ApoE-/-組增加;3、激光多普勒監(jiān)測提示DKO-OP組較ApoE-/--OP組缺血下肢血流灌注的恢復(fù)程度明顯增加;4、HE染色發(fā)現(xiàn)DKO-OP組較ApoE-/--OP組缺血下肢肌肉的損傷程度低,血管重塑能力強(qiáng);5、Western Blot方法測定DKO-OP組VEGF的表達(dá)明顯高于ApoE-/--OP組;6、免疫組織化學(xué)測定提示DKO-OP組缺血下肢肌肉內(nèi)血管新生明顯多于ApoE-/--OP組。結(jié)論:本研究表明免疫蛋白酶體亞單位β5i通過增加了缺血下肢的血管新生改善了小鼠下肢的缺血狀況,進(jìn)一步研究表明免疫蛋白酶體亞單位β5i是通過調(diào)節(jié)VEGF基因促進(jìn)了血管新生。通過本研究,初步明確了 β5i參與下肢缺血疾病的病理生理機(jī)制,為藥物治療下肢缺血提供新的參考靶點(diǎn)。
【圖文】：

雄性ＡｐｏＥ＋小鼠，高脂飼養(yǎng)后取１２周齡小鼠，依據(jù)文獻(xiàn)［２６］制逡逑。逡逑是制備小鼠下肢缺血性模型的有效方法。實(shí)驗(yàn)分為２組（每組逡逑、ＡｐｏＥｖ￥術(shù)組。Ａ．股總動(dòng)脈及股動(dòng)脈遠(yuǎn)端遠(yuǎn)端（近胭動(dòng)脈處）逡逑在兩組雙結(jié)之間剪斷。Ｂ，，小鼠術(shù)后恢復(fù)ｌｈ后，進(jìn)行激光多普勒逡逑定下肢缺血情況。Ｃ．統(tǒng)計(jì)兩組術(shù)前及術(shù)后下肢血流灌注率的情逡逑并于術(shù)前、術(shù)后３天及７天取腓腸肌，檢測免疫蛋白酶體亞單位逡逑。逡逑ｉｏｎ邋ｏｆ邋ｆｅｍｏｒａｌ邋ａｒｔｅｒｙ邋ｉｓ邋ａｎ邋ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ邋ｍｅｔｈｏｄ邋ｔｏ逡逑ｍｉｃ邋ｍｏｄｅｌ邋ｏｆ邋ｌｏｗｅｒ邋ｅｘｔｒｅｍｉｔｙ邋ｉｎ邋ｍｉｃｅ．邋Ｔｈｅ逡逑ｉｖｉｄｅｄ邋ｉｎｔｏ邋ｔｗｏ邋ｇｒｏｕｐｓ邋（ｎ邋＝邋１０）：邋ＡｐｏＥ—＂ｇｒｏｕｐ邋（ｎ邋＝邋１０）：逡逑（ｎ邋＝邋１０）．邋Ａ．邋Ｔｈｅ邋ｃｏｍｍｏｎ邋ｆｅｍｏｒａｌ邋ａｒｔｅｒｙ邋ａｎｄ邋ｐｒｏｘｉｍａｌ逡逑ｅｒｅ邋ｌｉｇａｔｅｄ邋ｂｙ邋ｄｏｕｂｌｅ邋ｋｎｏｔｓ邋ｌｉｇａｔｉｏｎ．邋Ｂｅｔｗｅｅｎ邋ｔｈｅ邋ｄｏｕｂｌｅ逡逑２１逡逑

圖２．激光多普勒血流檢測提示ＤＫＯ－ＯＰ組較Ａｐ0Ｅ＿／＿－恢復(fù)程度明顯增加。Ａ．邋０Ｄ各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Ｂ．邋３Ｄ邋敲除的ＡｐｏＥ＋手術(shù)組統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（＊Ｐ＜０．０５）。Ｃ．邋７Ｄ邋（術(shù)組較ＡｐｏＥ＋手術(shù)組存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（＊＊Ｐ＜０．０１）手術(shù)組較對照組下肢血流灌注明顯增加。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．邋Ｌａｓｅｒ邋Ｄｏｐｐｌｅｒ邋ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ邋ｓｈｏｗｅｄ邋ｔｉｓｃｈｅｍｉｃ邋ｂｌｏｏｄ邋ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋丨ｏｗｅｒ邋ｌｉｍｂｓｇｒｏｕｐ邋ｗａｓ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ邋ｉｎｃｒｅａｓｅｄ邋ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｔＡ．邋ＯＤ邋Ｔｈｅｒｅ邋ｗａｓ邋ｎｏ邋ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ邋ａｍｏｎｇ邋ｔｈｗａｓ邋ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ邋ｂｅｔｗｅｅｎ邋ｐ５ｉ邋ｋｎｏｃｋｏｕｔ邋ｉｎ邋ｔＡｐｏＥ－／－邋ａｎｄ邋ｏｐｅｒａｔｉｏｎ邋ｇｒｏｕｐ邋（＊Ｐ＜０．０５）邋．邋Ｃ．邋７Ｄｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ邋ｂｅｔｗｅｅｎ邋（３５ｉ邋ｋｎｏｃｋｏｕｔ邋ｉｎ邋ｔｈ
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R543

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2689391