【摘要】：目的:C型鈉尿肽(C-type natriureticpeptid,CNP)是鈉尿肽家族成員之一。有研究表明,CNP對心肌細(xì)胞具有抗肥大和纖維化的作用。然而,CNP對血管緊張素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)誘導(dǎo)連接蛋白失調(diào)的作用尚不清楚。本研究利用離體搏動(dòng)的大鼠心房研究CNP對Ang Ⅱ誘導(dǎo)心房肌組織連接蛋白失調(diào)的作用及其機(jī)制。方法:采用大鼠離體搏動(dòng)的心房灌流裝置,選用AngⅡ制備心房肌連接蛋白失調(diào)模型,并用CNP干預(yù)模型,然后利用蛋白印跡技術(shù)(western blot,WB)檢測連接蛋白失調(diào)相關(guān)蛋白表達(dá)變化。結(jié)果:過量的Ang Ⅱ顯著上調(diào)核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和AP-1,激活轉(zhuǎn)化生長因子-β1(growth factor-beta 1,TGF-β1),從而增加膠原蛋白 Ⅰ(CollagenⅠ)和基質(zhì)金屬蛋白酶2(matrixmetalloproteinases,MMP2)的表達(dá),最終導(dǎo)致心肌纖維化和連接蛋白40(Connexin40,Cx40)及Cx43的顯著下調(diào)。而CNP可完全阻斷AngⅡ?qū)宿D(zhuǎn)錄因子、TGF-β1、Collagen Ⅰ、MMP2、Cx40及Cx43表達(dá)的作用,并伴有腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的明顯激活。CNP的這種作用可被KT5823(protein kinase G,PKG的抑制劑)和百日咳毒素(pertussis toxin;natriuretic peptide C receptor,NPR-C 的抑制劑)所阻斷。結(jié)論:CNP可通過NPR-B和NPR-C激活A(yù)MPK信號(hào)通路,從而抵制Ang Ⅱ誘導(dǎo)的心房肌纖維化和連接蛋白表達(dá)失調(diào)的作用。表明,CNP-NPR-AMPK信號(hào)通路有望成為干預(yù)心肌連接蛋白失調(diào)性疾病的治療策略。
【圖文】：

延邊大學(xué)碩士學(xué)位論文邐實(shí)驗(yàn)材料與方法逡逑圖２．心房灌流過程示意圖逡逑２．５．３蛋白免疫印跡分析逡逑２．５．３．１實(shí)驗(yàn)原理逡逑蛋白免疫印跡（Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ，邋ＷＢ）實(shí)驗(yàn)是將電泳分離后的細(xì)胞或組逡逑織總蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持物ＰＶＤＦ膜上。以固相載體上的蛋白逡逑質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體（一抗）起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素逡逑標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，，經(jīng)過底物顯色以檢測電泳分離的特異性目的基逡逑因表達(dá)的蛋白成分。逡逑２＿５．３．２總蛋白的提取逡逑將置于－８０邋°Ｃ條件保存的心房肌組織取出，用眼科剪去除多余組織，逡逑置于含有裂解液（ＲＩＰＡ邋３００ｐｌ＋ＰＭＳＦ邋３＾１）的高溫滅菌的ＥＰ管中，剪碎，逡逑低溫下勻漿數(shù)次（確保每次勻漿的時(shí)間、速度和次數(shù)都一致），以上操作逡逑均應(yīng)保證在冰上進(jìn)行，且操作需快速完成。隨后以１５０００邋ｒｐｍ速度在４邋°Ｃ逡逑條件下離心３次
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R541

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 陳蓉;謝梅林;;異丙腎上腺素致小鼠心肌纖維化模型的制備及評(píng)價(jià)[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2014年09期

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1 丁大植;C型鈉尿肽對心房機(jī)械活動(dòng)的影響及其機(jī)制探討[D];延邊大學(xué);2010年

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1 簡悅;二甲雙胍調(diào)節(jié)AMPK/NF-κB信號(hào)通路對大鼠肺纖維化的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2017年

本文編號(hào)：2673653