【摘要】：第一部分 EphrinB2調(diào)控Stat3和TGF-β/Smad3信號通路相互作用促進(jìn)心臟纖維化研究目的:心臟纖維化是心室重塑導(dǎo)致心力衰竭的主要病理生理表現(xiàn),對其機(jī)制的研究有利于尋找干預(yù)靶點(diǎn)。EphrinB2,一種廣泛表達(dá)于哺乳動(dòng)物組織細(xì)胞的膜蛋白,在發(fā)育與疾病的血管形成中起著關(guān)鍵作用。但有報(bào)道,EphrinB2能保護(hù)腎臟損傷后纖維化,在皮膚和肺損傷后則促進(jìn)纖維化,提示EphrinB2存在著臟器特異性的纖維化作用,其在心臟纖維化中的作用尚不清楚。因此,本研究擬探討EphrinB 2在心臟病理性重塑中對心肌纖維化的作用與機(jī)制。方法和結(jié)果:EphrinB2在心力衰竭病人的心臟標(biāo)本、小鼠心肌梗死后心臟及血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的心肌肥厚心臟中表達(dá)均顯著升高,伴隨纖維化的加重,肌成纖維細(xì)胞的活化增多,膠原沉積增加。予小鼠心肌注射EphrinB2-shRNA慢病毒后,發(fā)現(xiàn)心臟EphrinB2敲低顯著減輕了心肌梗死后心臟纖維化,改善了心功能。同時(shí),運(yùn)用體外培養(yǎng)的新生小鼠原代心臟成纖維細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)無論常氧或缺氧環(huán)境,EphrinB2促進(jìn)了成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),EphrinB2的促纖維化作用通過激活Stat3通路和TGF-β/Smad3通路引起。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn),EphrinB2活化Stat3并通過調(diào)控Stat3的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域、coil-coil結(jié)構(gòu)域與Smad3的MH2結(jié)構(gòu)域結(jié)合促進(jìn)兩條通路協(xié)同參與EphrinB2介導(dǎo)的心臟纖維化。結(jié)論:我們的研究首次闡明了 EphrinB2在心肌損傷后的促心臟纖維化的作用,并通過調(diào)控Stat3與TGF-β/Smad3通路相互作用的機(jī)制,進(jìn)一步闡明了心室重塑的機(jī)制,為心力衰竭治療提供了新的靶點(diǎn)。第二部分 IL-17A和Stat3在小鼠心臟缺血再灌注損傷后心肌細(xì)胞凋亡中的作用與機(jī)制研究目的:心肌細(xì)胞凋亡是心臟缺血再灌注損傷的主要病理生理機(jī)制。IL-17A,一種促炎細(xì)胞因子,可直接誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡,但其具體作用機(jī)制尚未闡明。方法和結(jié)果:應(yīng)用體外培養(yǎng)的新生小鼠心肌細(xì)胞,構(gòu)建IL-17A誘導(dǎo)凋亡模型。研究發(fā)現(xiàn):新生小鼠心肌細(xì)胞表達(dá)IL-17A的受體RA和RC,但不表達(dá)IL-17A;外源性IL-17A通過激活iNOS表達(dá)誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡;同時(shí),IL-17A激活Stat3,抑制IL-17A誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡。運(yùn)用ChIP和熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn),我們證實(shí),Stat3通過特異性結(jié)合iNOS基因抑制子,抑制iNOS基因轉(zhuǎn)錄活性,代償性地拮抗了 IL-17A的促凋亡作用。進(jìn)一步構(gòu)建和應(yīng)用小鼠心臟缺血再灌注損傷模型,發(fā)現(xiàn)缺血再灌注損傷激活了 IL-17A/Stat3通路,而抑制Stat3活化增加了再灌注損傷后iNOS的表達(dá),加重了心肌細(xì)胞凋亡。結(jié)論:缺血再灌注損傷后IL-17A激活,并通過誘導(dǎo)iNOS表達(dá)促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡。同時(shí),IL-17A通過活化Stat3抑制iNOS轉(zhuǎn)錄,抑制IL-17A介導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡。
【圖文】：

與正常心臟相比，擴(kuò)心病晚期心力衰竭的心肌排列極為紊亂，，伴有大量的間質(zhì)組逡逑織浸潤。免疫組化結(jié)果提示，晚期衰竭心臟ＥｐｈｒｉｉｉＢ２表達(dá)升高，伴隨成纖維細(xì)胞向逡逑肌成纖維細(xì)胞激活的標(biāo)志物ａ－ＳＭＡ表達(dá)上調(diào)（圖１）。Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，逡逑人心力衰竭的心臟ＥｐｈｒｉｎＢ２表徸顯著增多，Ｉ型肢原沉積增加，心肌纖維化加重（圖逡逑２）。逡逑Ａ邐Ｂ逡逑Ｎｏｒｍａｌ邐ＤＣＭ邋ｐａｔｉｅｎｔ邐ｇ邋１０逡逑ｐ—－ｒｗｐ＂￣￣￣！邋ａ邋Ｔ逡逑灥邐、：，？Ｂ邋七邐？邋ｅ逡逑？邐ｌ＊邋．１＾－Ｊ邐ｃ逡逑ｔ／５邐Ｓ邐４邐■逡逑邐Ｊ邋—邋邐ｉ邋0Ｊ邐逡逑—：邐邋邋邋邋邋￡■邐Ｎｏｒｍａｌ邐ＤＣＭ逡逑ｃｎ邐邐邐逡逑１邋邐邐邋邐邋ｃ逡逑Ｓ邐——Ｉ邐＇、、邐？邐＿ｙｉ逡逑廣？邐－邐ｔ，邐１５１邐？逡逑邐邐邋ｌ邋？邋＼ｔ邋％邋■■邐＿邋ｌ邐ｇ逡逑／邋＾邋Ｆ－邋■＞！邐１１０＜邐——逡逑ａ邋卜”邐ｃ邐－１—逡逑ｋ，邐—￣Ｉ邋■邋Ｉ邋，逡逑＜邐，，邐邐１邐?

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文邐正文第一部分結(jié)果逡逑Ａ．上：正常人（Ｎｏｒｍａｌ）心臟標(biāo)本與擴(kuò)張型心肌病人（ＤＣＭ）心臟標(biāo)本ＨＥ染色逡逑代表圖；中、下：Ｎｏｒｍａｌ和ＤＣＭ心屚標(biāo)本ＥｐｈｒｉｎＢ２和ａ－ＳＭＡ的免疫組化染色逡逑代表圖。Ｂ－Ｃ．免疫組化染色ＥｐｈｒｉｎＢ２和ｏｔ－ＳＭＡ的半定量統(tǒng)計(jì)圖。標(biāo)尺為１００ｐｍ，逡逑＊代表邋Ｐ＜０．０５。逡逑
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R54

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1 張娟娟;;運(yùn)動(dòng)與心肌細(xì)胞凋亡[J];山西體育科技;2011年03期

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本文編號：2637762