【摘要】：研究目的:構建大鼠H9c2心肌肥厚細胞實驗模型,探索心肌肥厚細胞中鋅離子水平及鋅轉運體Zip7的表達變化,驗證鋅穩(wěn)態(tài)對心肌細胞的影響。研究方法:第一部分建立心肌肥厚細胞實驗模型:本課題選擇大鼠胚胎心臟組織中的H9c2心肌細胞作為實驗對象,在相同培養(yǎng)條件下隨機分為對照組及實驗組,實驗組利用血管緊張素II(Ang Ⅱ 0.2uM)誘導H9c2心肌細胞24小時培養(yǎng)成心肌肥厚細胞,通過倒置顯微鏡比較兩組心肌細胞形態(tài)差異、利用實時定量PCR(Q-PCR)方法檢測兩組細胞心肌肥大因子ANP、BNP、β-MHC的mRNA水平表達情況、利用Western Blot(WB)方法檢測BNP的蛋白水平表達情況。第二部分檢測H9c2心肌細胞中鋅離子水平及鋅轉運體Zip7的表達情況:心肌肥厚細胞實驗模型建立成功后,應用電感耦合等離子原子發(fā)射光譜法(ICPOES)檢測對照組(Control)及實驗組(Ang Ⅱ)H9c2心肌細胞中鋅離子濃度,應用Q-PCR及Western Blot方法分別檢測兩組心肌細胞中鋅轉運體Zip7的mRNA水平和蛋白水平表達情況。第三部分驗證不同濃度鋅離子對心肌細胞中Zip7表達及鋅穩(wěn)態(tài)的影響:在構建心肌肥厚細胞實驗模型成功的基礎上,通過外源鋅離子干預重新進行分組實驗:對照組(Control)、對照組加鋅離子螯合劑10uM(Control+TPEN)、實驗組(Ang Ⅱ)、實驗組加鋅離子螯合劑10uM(Ang Ⅱ+TPEN)、實驗組加氯化鋅1uM及鋅離子載體(Ang Ⅱ+Zn1)、實驗組加氯化鋅5uM及鋅離子載體(Ang Ⅱ+Zn5)、實驗組加氯化鋅10uM及鋅離子載體(Ang Ⅱ+Zn10);利用Q-PCR及Western Blot方法分別檢測各組H9c2心肌細胞中鋅轉運體Zip7、BNP的mRNA水平和蛋白水平表達情況。研究結果:1.通過倒置顯微鏡比較兩組心肌細胞形態(tài)差異,與對照組相比,實驗組心肌細胞胞體直徑變長,細胞表面積變大,細胞間無空隙。Q-PCR結果顯示實驗組心肌細胞ANP、BNP、β-MHC的mRNA水平表達均高于對照組(P0.05),Western Blot結果顯示實驗組心肌細胞BNP的蛋白水平表達高于對照組(P0.05),差異具有統(tǒng)計學意義。2.ICPOES結果顯示實驗組心肌細胞中鋅離子濃度明顯高于對照組(P0.05)。Q-PCR及Western Blot結果顯示實驗組心肌細胞鋅轉運體Zip7的mRNA水平和蛋白水平表達均高于對照組(P0.05),差異具有統(tǒng)計學意義。3.給予不同濃度鋅離子干預H9c2細胞后Q-PCR及Western Blot結果顯示:(1)Control+TPEN組H9c2心肌細胞中Zip7的mRNA及蛋白表達水平均高于Control組(P0.05),差異有統(tǒng)計學意義;(2)Ang Ⅱ+TPEN組H9c2心肌細胞中Zip7的mRNA及蛋白表達水平均高于Ang Ⅱ組(P0.05),差異有統(tǒng)計學意義;(3)給予氯化鋅干預后H9c2心肌肥厚細胞中Zip7的mRNA及蛋白表達水平均低于Ang Ⅱ組(P0.05),隨著氯化鋅濃度的增加,心肌細胞中Zip7的表達水平呈梯度下降趨勢,差異具有統(tǒng)計學意義;(4)Control+TPEN組H9c2心肌細胞中BNP的mRNA及蛋白表達水平均高于Control組(P0.05),差異有統(tǒng)計學意義;(5)Ang Ⅱ+TPEN組H9c2心肌細胞中Zip7的mRNA及蛋白表達水平與Ang Ⅱ組之間的差異無統(tǒng)計學意義;(6)給予1uM氯化鋅干預后,H9c2心肌肥厚細胞中BNP的表達水平與Ang Ⅱ組之間的差異無統(tǒng)計學意義,隨著氯化鋅濃度的增加,心肌細胞中BNP的表達水平低于Ang Ⅱ組(P0.05),呈梯度下降趨勢,差異具有統(tǒng)計學意義。研究結論:1.本研究在細胞水平成功利用Ang Ⅱ誘導H9c2心肌細胞構建心肌肥厚細胞實驗模型。2.心肌肥厚細胞中鋅離子濃度與鋅轉運體Zip7表達水平均明顯升高。3.心肌細胞中鋅離子水平與鋅轉運體Zip7的表達水平呈負相關。給予鋅離子干預后心肌肥厚細胞中BNP的表達水平有所下降,初步證實維持鋅穩(wěn)態(tài)對心肌細胞具有保護作用,但具體的保護作用機制有待深入研究。
【圖文】：

構建心肌肥厚細胞實驗模型分組示意圖

圖 9.給予不同濃度氯化鋅以及鋅離子螯合劑分組示意圖如圖 9 所示，在心肌肥厚細胞實驗模型成功的基礎上，給予不同濃度氯化鋅及鋅離子螯合劑進行分組實驗：對照組（Control）、對照組加鋅離子螯合劑10uM（Control+TPEN）處理 2h、實驗組（Ang II）、實驗組加鋅離子螯合劑（AngII +TPEN）處理 2h、實驗組加氯化鋅 1uM 及鋅離子載體 4uM（Ang II +Zn1）處理 30min、實驗組加氯化鋅 5uM 及鋅離子載體 4uM（Ang II+Zn5）處理 30min、實驗組加氯化鋅 10uM 及鋅離子載體 4uM（Ang II +Zn10）處理 30min。4.2 Q-PCR 法檢測各組心肌細胞 Zip7 及 BNP 的 mRNA 水平表達按照前文實驗步驟利用 Q-PCR 方法檢測各組 H9c2 心肌細胞中鋅轉運體Zip7 及 BNP 的 mRNA 水平表達情況（參照 2.4.1.2）。4.3 WB 法檢測各組心肌細胞 Zip7 及 BNP 的蛋白水平表達按照前文實驗步驟利用 WB 方法檢測各組 H9c2 心肌細胞中鋅轉運體 Zip7
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R541.6

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本文編號：2630635