發(fā)布時間：2020-03-29 05:15

【摘要】：背景冠狀動脈粥樣硬化(coronary atherosclerosis)特指發(fā)生在冠狀動脈上的動脈粥樣硬化,主要特征為斑塊形成以及斑塊侵蝕、破裂、血栓形成導致心肌缺血、心肌梗塞等嚴重的心血管事件。目前認為血管冠狀動脈內皮損傷是其始動環(huán)節(jié)。高血壓、吸煙、血脂異常、糖尿病和肥胖等,與血管內皮損傷等慢性心血管危險因素或與之相關的有害循環(huán)刺激物持續(xù)作用,可破壞血管內皮系統及影響內皮完整性,引起血管內皮穩(wěn)態(tài)失調和功能紊亂,出現血管收縮、氧化應激、血栓形成、炎癥反應等,激活下游信號通路,與動脈粥樣硬化血管重塑有關的一系列分子、細胞、血管壁結構改變,久之出現斑塊形成甚至其后遺癥,如心肌缺血、心肌梗死。氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,OxLDL)可引起多種血管內皮損傷,導致其功能性破壞,參與動脈粥樣硬化的起始和進展,在動脈粥樣硬化早期階段發(fā)揮核心作用。冠狀動脈作為向心臟直接供血的血管,其內皮細胞與其他動脈內皮細胞的特性有所不同,而冠狀動脈是動脈粥樣硬化高發(fā)的區(qū)域且后果嚴重。目前,關于OxLDL對冠狀動脈內皮細胞損傷機制尚不清楚,因此深入探討OxLDL對冠狀動脈內皮細胞功能的損傷及其具體機制具有重要意義。目的1.明確OxLDL對冠狀動脈內皮細胞造成的功能損傷及基因表達差異;2.探討p21蛋白在OxLDL引起的冠狀動脈內皮損傷中的作用及其機制。方法1.利用血管張力檢測OxLDL對大鼠冠狀動脈和腸系膜動脈內皮舒張功能的影響;2.利用CCK-8與劃痕實驗實驗檢測HCAECs細胞的增殖能力與遷移能力;3.利用TUNEL法檢測HCAECs的凋亡水平;4.HDL試劑盒檢測HCAECs上清液中LDH水平;5.利用轉錄組測序(RNA-seq)進行全轉錄本水平測序并分析OxLDL處理HCAECs 24h后組間的差異基因,6.利用String和KEGG數據庫顯著差異基因進行信號轉導通路的分析并進行信號通路調控網絡構建;7.利用蛋白質免疫印跡(Western blot,WB)法檢測對差異基因的相關蛋白進行檢測。結果1.血管張力實驗提示OxLDL可減弱大鼠冠狀動脈和腸系膜動脈內皮依賴性血管舒張功能;2.細胞劃痕、CCK-8和細胞上清液HDL檢測實驗提示OxLDL處理HCAECs后,細胞遷移和增殖能力均受到顯著抑制、細胞上清液HDL水平增多;3.TUNEL和Western blot實驗提示OxLDL處理HCAECs后,細胞凋亡率顯著增加,凋亡相關蛋白變化與凋亡水平一致;4.轉錄組測序(RNA-Seq)發(fā)現OxLDL處理HCAECs 24 h后,979條基因出現差異表達,其中130條基因為已知基因,70條基因表達上調,60條基因表達下調;通過String和KEGG數據庫分析得出CDKN1A(靶蛋白p21)和整合素相關基因與細胞的周期調控和遷移等功能有關并可能發(fā)揮重要作用;5.經過OxLDL處理后,p21蛋白表達水平在24 h時顯著升高,但72 h時下降;p21-siRNA預處理后在24 h時可顯著增強OxLDL誘導的細胞凋亡,但72 h時則無顯著差異;p21-siRNA預處理可抑制HCAECs的細胞增殖。結論1.OxLDL可對冠狀動脈內皮細胞造成損傷;2.早期OxLDL引起的HCAECs中p21蛋白表達的上調可能為細胞抗凋亡的應激保護機制;而處理的后期p21蛋白表達下調,可能是OxLDL誘導細胞凋亡的發(fā)生的關鍵因素之一;3.早期OxLDL引起的HCAECs中p21蛋白表達上調并不是抑制細胞增殖的主要因素,而整合素通路的調節(jié)可能在其中發(fā)揮關鍵作用。
【圖文】：

圖 1 OxLDL 100 mg/L 對乙酰膽堿誘導的大鼠腸系膜動脈和冠狀動脈內皮依賴性舒張作用的影響(Mean±SD, n=6)。ACh：乙酰膽堿，CA：冠狀動脈，，MA：腸系膜動脈。**p<0.01 vs. PPS+PPS 或 OxLDL+ PPS;##p<0.01 vs. PPS+ACh.Figure 1 Effects of 100 mg/L OxLDL on acetylcholine-induced endothelium-dependent

圖 2 OxLDL 對 HCAECs 遷移的影響（Mean±SD）。A B。細胞遷移（細胞劃痕實驗,n=3）。PBS：磷酸鹽緩沖鹽水溶液；OxLDL：氧化型低密度脂蛋白 100 μg/mL。*p <0.05vs. PBS。Figure 2 Impact of OxLDL on HCAECs migration. A~B. Cell migration (Cell scratch test,
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R541.4

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉韻;譚斌;秦旭平;;oxLDL對血管內皮細胞的損傷機制[J];現代生物醫(yī)學進展;2010年19期

2 王群山;抗-oxLDL抗體的檢測與動脈粥樣硬化[J];國外醫(yī)學.心血管疾病分冊;2003年01期

3 陳端霞,范向陽,王迎雪,朱文玲;抗氧化維生素對氧化低密度脂蛋白的影響[J];中國臨床營養(yǎng)雜志;1997年02期

4 李菊香,羅偉,汪進益,蘇海,饒芳,程曉曙,吳清華;葛根素對oxLDL培養(yǎng)血管內皮細胞內源性一氧化氮合酶抑制物代謝的研究[J];中國藥科大學學報;2004年04期

5 李偉皓;紀昕;高偉;張明明;張菲菲;張智萍;;氧化型低密度脂蛋白抗體與成人急性淋巴細胞性白血病相關性研究[J];河北醫(yī)科大學學報;2019年05期

6 Chuanbo Huang;Weili Yang;Junpei Wang;Yuan Zhou;Bin Geng;Georgios Kararigas;Jichun Yang;Qinghua Cui;;The DrugPattern tool for drug set enrichment analysis and its prediction for beneficial effects of oxLDL on type 2 diabetes[J];Journal of Genetics and Genomics;2018年07期

7 曾亮海;王剛;尹珊輝;于瀟華;徐競鷗;;丙丁酚對oxLDL誘導血管內皮細胞增殖抑制的保護作用[J];現代生物醫(yī)學進展;2010年15期

8 魏婧婧;張亞臣;;氧化低密度脂蛋白與動脈粥樣硬化[J];心血管病學進展;2008年S1期

9 梁中書,楊侃,曹宇,歐陽茂,張志輝,李靜樂,唐曉鴻,張夢璽;人oxLDL自身免疫復合物的體外致動脈粥樣硬化作用[J];中南大學學報(醫(yī)學版);2005年02期

10 李宗信,黃小波,李斌,游云,韓東,馬萬云,李文,廖福龍;應用原子力顯微鏡實時觀察oxLDL對大鼠腦微血管內皮細胞膜結構的影響[J];中國血液流變學雜志;2004年03期

相關會議論文 前10條

1 ;The Expression of Myosin Light Chain Kinase in oxLDL-treated HUVECs is Regulated by the Melatonin through the pathway of ERK/MAPK[A];華東六省一市生物化學與分子生物學會2009年學術交流會論文摘要匯編[C];2009年

2 Ding Yiling;Deng Yali;;The Expression of LOX-1、oxLDL in the peripheral blood in Pre-eclampsia[A];中華醫(yī)學會第十次全國婦產科學術會議產科會場（產科學組、妊高癥學組）論文匯編[C];2012年

3 李宏霞;孔凡娟;白淑芝;赫文;邢文靜;席玉慧;李鴻珠;田野;徐長慶;;鈣敏感受體參與oxLDL誘導的大鼠血管平滑肌細胞MMP-2產生[A];第八屆海峽兩岸心血管科學研討會論文集[C];2011年

4 孫少衛(wèi);朱炳陽;高治平;廖端芳;;Caveolae和Caveolin-1介導ox-LDL的攝取及跨內皮轉運[A];第六屆海峽兩岸心血管科學研討會論文摘要集[C];2007年

5 ;Effects of SOCS1 on proliferation induced by oxLDL in vascular smooth muscle cells[A];第十三次全國心血管病學術會議論文集[C];2011年

6 ;MicroRNA profiling identifies miR-146a and miR-29a and their target genes CD40L and LPL in the regulation of oxLDL-treated dendritic cell maturation,inflammatory response and lipid uptake[A];第十三次全國心血管病學術會議論文集[C];2011年

7 李玫;吳宗貴;張國元;劉莉;曹陽;;oxLDL對單核細胞與內皮細胞粘附的影響及其作用機制[A];第一屆全國中西醫(yī)結合心血管病中青年醫(yī)師論壇論文匯編[C];2008年

8 Ke Yang;Xiao Qun Wang;Lin Lu;Qiu Jing Chen;Wei Feng Shen;;MiR-146a inhibits oxidized low-density lipoprotein-induced lipid accumulation and inflammatory response via targeting toll-like receptor 4[A];中華醫(yī)學會第十五次全國心血管病學大會論文匯編[C];2013年

9 吳凡;屈伸;;oxLDL及炎性因子對ABCA1功能和表達的影響及相關信號轉導機制的探討[A];湖北省暨武漢生物化學與分子生物學學會第八屆會員代表大會和第十五次學術年會論文摘要匯編[C];2004年

10 李敬誠;;TRPV1 activation impedes foam cell formation by inducing autophagy in oxLDL-treated vascular smooth muscle cells[A];7th中華醫(yī)學會神經病學分會全國中青年神經病學學術大會暨第十屆全國神經系統感染性疾病與腦脊液細胞學學術大會論文匯編[C];2014年

相關重要報紙文章 前1條

1 孫迎基 譯;到底真兇是誰？[N];醫(yī)藥經濟報;2002年

相關博士學位論文 前10條

1 劉菊香;高糖/oxLDL狀態(tài)下整合素avβ5介導肝竇毛細血管化的分子機制及干預研究[D];蘭州大學;2018年

2 鄭華;oxLDL介導的特異性免疫應答影響動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的研究[D];第一軍醫(yī)大學;2004年

3 徐海珊;植物雌激素α-玉米赤霉醇對oxLDL誘導人血管內皮細胞ET-1基因表達的影響[D];中國協和醫(yī)科大學;2005年

4 盧成志;中國人PON1活性及其L/M55基因多態(tài)性和oxLDL水平與伴高血糖的冠心病患者冠脈病變關系的研究[D];四川大學;2005年

5 孟濤;oxLDL和其受體LOX-1誘導滋養(yǎng)細胞凋亡及與子癇前期發(fā)病關系的研究[D];中國醫(yī)科大學;2007年

6 王燕;oxLDL與動脈粥樣硬化的相關性研究-oxLDL與動脈粥樣硬化關系的臨床觀察研究—體外阻斷oxLDL對內皮細胞損傷的實驗研究[D];山東大學;2009年

7 吳永港;P38信號通路在氧化性低密度脂蛋白導致內皮祖細胞數量及功能改變方面的作用[D];中南大學;2009年

8 劉君玲;艾地苯醌對oxLDL誘導的血管內皮細胞損傷的保護作用及其機制研究[D];山東大學;2015年

9 張明杰;SIRT1在血管平滑肌源性泡沫細胞遷移中的作用和機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2016年

10 李源杰;尿酸和血管內皮功能障礙相關研究[D];北京協和醫(yī)學院;2009年

相關碩士學位論文 前10條

1 陳芋丹;TLR4及ROS在oxLDL/β2GPI/aβ2GPI復合物誘導HUVEC凋亡中的作用探討[D];江蘇大學;2019年

2 陳碩;OxLDL對冠狀動脈內皮細胞功能的損傷及其機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2019年

3 李婷婷;TM6SF2在oxLDL誘導的人血管平滑肌細胞脂質蓄積中的作用及機制[D];南華大學;2018年

4 歐陽航;oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗體復合物促進A7r5細胞趨化和遷移及脂質積累[D];江蘇大學;2018年

5 王德偉;姜黃素抑制oxLDL誘導HUVECs凋亡及其機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2017年

6 蔡謙謙;TLR4/NF-κB在oxLDL/β2GPI/anti-β2GPI復合物促進HUVEC表達炎癥因子中的作用探討[D];江蘇大學;2017年

7 王旭;oxLDL誘導血管平滑肌泡沫細胞形成及其機制的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2017年

8 崔佳;oxLDL與食管癌的關聯及機理探討[D];濟南大學;2011年

9 吳輝文;法舒地爾對oxLDL損傷內皮細胞功能的影響[D];華中科技大學;2007年

10 王京;急性缺血性腦卒中患者尿酸、oxLDL與頸動脈粥樣硬化的相關性研究[D];承德醫(yī)學院;2016年

本文編號：2605505