【摘要】：研究背景動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病,不穩(wěn)定粥樣硬化斑塊的破裂導致血栓形成及急性冠脈綜合癥的發(fā)生�；|金屬蛋白-9可以降解細胞外基質,研究表明,基質金屬蛋白酶-9表達分泌失衡,與粥樣斑塊的不穩(wěn)定密切相關。脂多糖與去甲腎上腺素均可參與粥樣斑塊的病理發(fā)展過程。但脂多糖與去甲腎上腺素如何調控基質金屬蛋白酶-9的表達及相關的機制仍不清楚。我們的研究目的是探討去甲腎上腺素與脂多糖,這兩種與動脈粥樣硬化相關的因子,對于基質金屬蛋白酶-9表達的調控及機制。研究方法單核細胞參與粥樣硬化斑塊的病理進程。我們利用單核細胞系THP-1以及THP-1誘導分化來的巨噬細胞測定去甲腎上腺素與LPS對基質金屬蛋白酶-9表達的影響。主要研究方法包括：1.利用實時定量PCR檢測基質金屬蛋白酶,基質金屬蛋白酶內源性抑制劑-1mRNA在單核細胞的表達情況。2.利用Elisa測定細胞上清中基質金屬蛋白酶-9以及基質金屬蛋白酶內源性抑制劑-1的表達。3.利用明膠酶譜方法測定THP-1以及THP-1誘導而來的巨噬細胞基質金屬蛋白酶-9的明膠降解活性。4. Western Blot實驗研究去甲腎上腺素與脂多糖對基質金屬蛋白酶-9分泌相關信號通路的調控。5.通過應用腎上腺素受體抑制劑,MAPK通路抑制劑以及C-FOS siRNA等干預手段來闡明具體的機制。研究結果1.去甲腎上腺素可以上調脂多糖介導的THP-1細胞基質金屬蛋白酶-9/基質金屬蛋白酶內源性抑制劑-1的mRNA以及蛋白表達。2.在THP-1及THP-1誘導的巨噬細胞,去甲腎上腺素可以增強脂多糖介導的基質金屬蛋白酶-9的酶活性。3. Beta腎上腺素受體抑制劑普萘洛爾預處理可以抑制去甲腎上腺素／脂多糖介導的基質金屬蛋白酶-9的表達,而alpha腎上腺素受體抑制劑酚妥拉明則沒有作用。4.去甲腎上腺素上調脂多糖介導的單核細胞ERK, JNK的磷酸化水平,并抑制P38的激活。ERK, JNK抑制劑抑制了去甲腎上腺素和脂多糖介導的基質金屬蛋白酶-9的分泌及酶活性。5.去甲腎上腺素可以上調LPS介導的C-FOS的表達。這種作用可以被ERK, JNK的抑制劑以及普萘洛爾所逆轉。C-FOS敲低后,去甲腎上腺素/LPS介導的MMP-9的酶活性上調被抑制。6.去甲腎上腺素可以上調脂多糖介導的C-JUN的磷酸化水平。結論1.去甲腎上腺素可以增強脂多糖介導的單核細胞與巨噬細胞基質金屬蛋白酶-9的表達及酶活性。2.去甲腎上腺素通過激活Beta腎上腺素受體來實現(xiàn)與脂多糖的協(xié)同作用。3.去甲腎上腺素通過激活細胞內的ERK/JNK信號通路調控脂多糖介導的THP-1基質金屬蛋白酶-9的表達。4.AP-1轉錄因子的組成成分C-FOS以及C-JUN在去甲腎上腺素與脂多糖協(xié)同介導基質金屬蛋白酶-9的過程中起重要作用。
【圖文】：

單核細胞可ＬNB粗附在活化的內皮細胞，浸潤聚集在斑塊區(qū)域，分化成為巨途細逡逑胞。巨噓細胞吞噓脂質，形成泡沫細胞。這些免疫細胞同時可�。轓B分泌《種炎癥因逡逑子，促進平滑肌細胞的遷移增趣，促進斑塊的進展（［２－７］（圖１－１）。在動脈粥逡逑樣硬化斑塊易破裂的部位，也往往是免疫細胞大量聚集的部位巧］。這提示我們，逡逑單核及巨哇細胞與斑塊的穩(wěn)定性密切相關。逡逑基質金屬蛋白酶－９邋（Ｍａｔｒｉｘ邋ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－９，ＭＭＰ－９）是邋ＭＭＰ邋家族的一逡逑員，又被稱為明膠酶Ｂ（ｇｅｌａｔｉｎ邋Ｂ）。ＭＭＰ－９及其內源性抑制劑（ｔｉｓｓｕｅ邋ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ邋ｏｆ逡逑ｍａｔｒｉｘ邋ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－１，ＴＩＭＰ４）共同參與維持細胞外基質的平衡［９－１３］。除此逡逑之外，ＭＭＰ－９的底物還包括炎癥因子，，細胞因子等［１４－１６］。近些年的研究證實，逡逑ＭＭＰ－９與粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性相關［１７，邋１|�。噎h(huán)矯媯停停校箍桑。轓B通過降解細逡逑胞外基質

５．２０００ｘ２０ｎｉｉｎ。逡逑可從看到血樣被分為四層，第一層：為血漿或紐織勻漿液層。第二層：狀乳白包單個核細胞。第Ｅ層：為透明分離液層。第四層；為紅細胞層。吸管將６管中的第二層白朦層（２０山）轉移到５０ｍｌ離，心管，加入５０ｍｌ生（圖邋３－１邋）。逡逑
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R543.5

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