【摘要】：心力衰竭作為一類嚴(yán)重的臨床病征,其表現(xiàn)為心泵功能衰退的同時(shí),還常常伴隨肝、腎、肺等其他靶器官的損傷。心力衰竭時(shí)心臟射血分?jǐn)?shù)降低,腎臟血流量減少,腎小球的濾過率隨之降低,致使腎臟血流二次分布,最終使腎功能遭到嚴(yán)重?fù)p害。腎功能損傷可反作用于心臟,使其衰竭癥狀進(jìn)一步加重,影響治療效果,導(dǎo)致病死率升高�？梢�,二者相互作用,彼此影響,構(gòu)成惡性循環(huán),進(jìn)一步加速心衰的進(jìn)展。雷米普利(Ramipril,RAM)作為一種高效的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(Angiotensin-Converting Enzyme Inhibitors,ACEI),是治療心力衰竭的一線用藥,但對于其在腎臟保護(hù)方面的具體機(jī)制仍眾說紛紜,該研究通過檢測心衰大鼠腎臟組織細(xì)胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3及細(xì)胞色素C(CytochromeC,Cyt-C)的表達(dá)水平,探討雷米普利可能對心力衰竭大鼠腎臟組織細(xì)胞凋亡所產(chǎn)生的影響。目的:應(yīng)用腎上腹主動(dòng)脈縮窄法建造心衰大鼠相關(guān)模型。雷米普利干預(yù)成功后的模型,采用蘇木素-伊紅(HE)染色方法查看大鼠的腎臟形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu),TUNEL技術(shù)分析腎臟組織凋亡情況,免疫組織染色法(SP)和蛋白免疫印跡法測定Bcl-2、Bax、Caspase-3及Cytochrome C蛋白于大鼠腎臟組織內(nèi)的表達(dá)趨勢,RT-PCR法對Bcl-2、Bax、Caspase-3及Cytochrome C的mRNA在大鼠腎臟組織內(nèi)的表達(dá)水平進(jìn)行測定,通過觀察雷米普利對心衰大鼠腎臟細(xì)胞凋亡及相關(guān)凋亡因子的影響,探討該藥對心衰大鼠腎臟組織的可能保護(hù)機(jī)制。方法:1取雄性的清潔Wistar大鼠40只,任意選取其中10只大鼠納入假手術(shù)組,其他大鼠均行腹主動(dòng)脈縮窄操作術(shù)。以左心室舒張末壓(LVEDP)≥15mmHg為模型構(gòu)建成功的標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)對假手術(shù)組大鼠只游離腹主動(dòng)脈并不結(jié)扎。取造模成功的20只大鼠隨機(jī)分至模型對照組及雷米普利組。2每組大鼠均抵達(dá)觀察終點(diǎn)時(shí),相應(yīng)大鼠的lvedp使用多導(dǎo)電生理記測儀監(jiān)測并精細(xì)完整的記錄數(shù)據(jù)。取出大鼠腎臟,進(jìn)行稱量。3he染色法觀察每組實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的腎臟細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。4tunel技術(shù)描述腎臟的組織凋亡概況,統(tǒng)計(jì)組織凋亡率(ai)。5sp和westernblot技術(shù)分析大鼠腎臟標(biāo)本內(nèi)bcl-2、bax、caspase-3及cyt-c蛋白的表達(dá)情況。6rt-pcr技術(shù)測定相關(guān)大鼠腎臟組織細(xì)胞中bcl-2、bax、caspase-3及cyt-c的mrna表達(dá)水平。結(jié)果:1lvedp結(jié)果假手術(shù)組、模型對照組以及雷米普利組大鼠的lvedp分別為:(5.52±0.95)mmhg、(19.48±1.68)mmhg和(12.16±1.46)mmhg。模型對照組及雷米普利組大鼠的lvedp與假手術(shù)組相比較均有所上升(p0.01);同模型對照組比較,雷米普利組大鼠的lvedp明顯下降(p0.01)。2he染色觀察實(shí)驗(yàn)對象腎臟組織的病理形態(tài)學(xué)改變假手術(shù)組大鼠腎臟細(xì)胞外象正常,分布規(guī)整、緊致,結(jié)構(gòu)明朗;模型對照組腎小管結(jié)構(gòu)較混亂,上皮細(xì)胞分布散亂、模糊,管腔擴(kuò)大;雷米普利組腎小管結(jié)構(gòu)亦出現(xiàn)少許混亂,上皮細(xì)胞分布稀疏、模糊,但未見管腔擴(kuò)張。3每組大鼠的腎臟細(xì)胞凋亡指數(shù)(ai)結(jié)果顯示假手術(shù)組、模型對照組、雷米普利組大鼠的ai結(jié)果分別是(2.51±0.97)%、(40.79±1.31)%和(19.89±1.24)%。模型對照組及雷米普利組大鼠與假手術(shù)組大鼠的ai比較均有所增高(p0.01),與模型對照組比較,雷米普利組ai明顯降低(p0.01)。4免疫組織化學(xué)染色法分析每實(shí)驗(yàn)組對象腎臟組織中bcl-2及bax蛋白的表達(dá)情況bcl-2蛋白在每組大鼠腎臟細(xì)胞中的表達(dá)趨勢為:假手術(shù)組明顯表達(dá):鏡下顯示胞內(nèi)含有較多暗棕黃色物質(zhì),模型對照組少量表達(dá),雷米普利組則可見中等程度表達(dá),表達(dá)量明顯少于假手術(shù)組,同時(shí)高于模型對照組。bax蛋白表達(dá)結(jié)果則顯示:假手術(shù)組大鼠腎臟細(xì)胞內(nèi)無明顯暗棕色物質(zhì);模型對照組大鼠相關(guān)細(xì)胞內(nèi)則有明顯暗棕色物質(zhì)表達(dá),雷米普利組可見中等量暗棕色物質(zhì)表達(dá)。5蛋白免疫印跡法測定每組大鼠腎臟組織中Caspase-3及Cyt-C蛋白的表達(dá)情況與假手術(shù)組比較,后兩組Caspase-3及Cyt-C蛋白的顯現(xiàn)水平均顯著增高(P0.01),與模型對照組相比,雷米普利組Caspase-3及Cyt-C蛋白的顯現(xiàn)則顯著降低(P0.01)。6 RT-PCR法估測每組實(shí)驗(yàn)大鼠中Bcl-2、Bax、Caspase-3及Cyt-C的mRNA在腎臟組織內(nèi)的表達(dá)水平同假手術(shù)組相比,模型對照組大鼠中Bax、Caspase-3及Cyt-C的mRNA表達(dá)均有不同程度提升(P0.01),Bcl-2的mRNA表達(dá)則有所下降(P0.01);雷米普利組大鼠中Bax、Caspase-3及Cyt-C的mRNA表達(dá)較模型對照組顯著降低(P0.01),Bcl-2的mRNA表達(dá)則顯著增高。結(jié)論:1心力衰竭大鼠腎臟的損傷同細(xì)胞凋亡的發(fā)生聯(lián)系密切。2雷米普利能夠有效抑制心力衰竭大鼠腎組織細(xì)胞凋亡,其機(jī)制可能與調(diào)控Bcl-2、Bax、Caspase-3及Cyt-C的表達(dá),進(jìn)而阻斷線粒體途徑有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R541.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2569844