【摘要】：目的探討沉默信息調節(jié)因子1(silent mating type information regulation 2 homolog-1,SIRT1)對氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)誘導的血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)泡沫化的作用和相關的分子機制。方法用組織貼塊法體外培養(yǎng)原代VSMC,用80μg/mL ox-LDL刺激VSMC誘導泡沫細胞形成。檢測SIRT1在ox-LDL刺激不同時間(24、48、72 h)的表達變化。SIRT1的活性調控分別應用SIRT1激動劑(SRT1720,SRT,1μmol/L)和抑制劑(nicotinamide,Nic,100μmol/L)進行干預。干預24 h后采用Western blot檢測VSMC過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、�；o酶A:膽固醇�；D移酶1(A-cholesterol acyltransferase 1,ACAT1)的蛋白表達,干預48 h后采用油紅O染色檢測細胞內脂質沉積和泡沫細胞形成情況。應用PPARγ激動劑(Rosiglitazone,RSG,50μmol/L)和抑制劑(GW9662,10μmol/L)調控PPARγ的表達,Western blot檢測VSMC中ACAT1的表達。結果 1ox-LDL誘導的VSMC泡沫細胞中,SIRT1蛋白表達在48 h降低約47%(P0.01);油紅O染色顯示,SRT可以抑制VSMC泡沫細胞形成,而Nic可逆轉SRT的抑制作用;2ox-LDL誘導的VSMC泡沫細胞中ACAT1的表達顯著增加[(2.77±0.70),P0.01],SIRT1激動劑SRT可顯著抑制ACAT1的表達[(0.90±0.27),P0.01],而SIRT1抑制劑Nic可阻斷這一作用,升高ACAT1的表達[(2.25±0.37),P0.05];3ox-LDL誘導的VSMC泡沫細胞中PPARγ的表達減少[(0.73±0.12),P0.05],SIRT1激動劑SRT可上調VSMC中PPARγ的表達[(0.98±0.16),P0.05],SIRT1抑制劑Nic抑制PPARγ的表達[(0.47±0.13),P0.01];4PPARγ激動劑RSG可抑制ACAT1的表達[(0.73±0.09),P0.01],而PPARγ抑制劑GW9662則上調ACAT1表達[(1.68±0.09),P0.01]。結論 SIRT1通過上調VSMC中PPARγ表達而抑制ACAT1表達,從而抑制ox-LDL誘導的VSMC泡沫樣變。
【圖文】：

。1．2．4油紅O染色VSMC以2×105/孔定量接種于24孔板中，無血清DMEM饑餓24h，再將VSMC分為空白對照組、ox-LDL組、SRT+ox-LDL組、SRT+Nic+ox-LDL組，培養(yǎng)48h。取出后，用PBS液漂洗2次，4%多聚甲醛固定30min，油紅O避光染色，蒸餾水清洗，，倒置顯微鏡下觀察。1．3統(tǒng)計學分析使用SPSS18．0統(tǒng)計軟件，每項實驗至少重復3次，數(shù)據(jù)以xs

本文編號：2533532