【摘要】：目的:探討miR-155在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)介導的人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)自噬中的作用。方法:1.采用濃度為100μg/m L的ox-LDL對HUVECs作用處理,分別在不同的時刻收集細胞,用電鏡觀察HUVECs內的超微改變,同時采用qRT-PCR技術檢測LC3和p62的mRNA的表達及mi R-155的表達,用Western blot技術測定LC3-II及p62的蛋白水平,初步觀察ox-LDL對HUVECs自噬水平及miR-155水平的改變。2.將HUVECs分為正常對照組,ox-LDL組,ox-LDL+miR-155mimic組,ox-LDL+miR-155inhibior組及ox-LDL+miRNA negative control(NC)組五個試驗組。其中正常對照組不加任何干擾,而ox-LDL組,ox-LDL+miR-155mimic組,ox-LDL+miR-155inhibior組及ox-LDL+miRNA NC組則用ox-LDL(100μg/m L)進行誘導刺激。用電鏡觀察各組細胞內的自噬體的形狀和數量,用qRT-PCR方法測定LC3和p62的mRNA的水平,用Western blot技術檢測LC3-II及p62的蛋白表達水平。結果:1.我們用100μg/m L的ox-LDL處理HUVECs 6小時、12小時后,電鏡結果顯示細胞內出現較多的自噬體及自噬溶酶體,qRT-PCR技術顯示LC3m RNA表達上調,而p62mRNA表達下調,western blot結果顯示LC3-II/GAPDH的水平上升,而p62/GAPDH的水平下降。由于細胞內LC3上調及p62下調在6小時的時候最明顯,因此,我們將6小時作為后續(xù)實驗的作用時間點。此外,qRT-PCR結果顯示ox-LDL處理后的細胞內miR-155的表達增加。2.用miR-155mimic,miR-155inhibior及miR-155 NC對細胞進行轉染,并用100μg/mL ox-LDL處理細胞6小時后,我們發(fā)現,上調miR-155的表達后,細胞內自噬體及自噬溶酶體的數量明顯增加,同時LC3的表達水平提高,p62的表達程度降低,而下調miR-155的水平后,細胞內自噬體的數目減少,LC3表達降低,p62的表達水平升高。結論:ox-LDL能夠介導HUVECs自噬,并上調miR-155表達;miR-155能夠調節(jié)ox-LDL誘導的HUVECs自噬。
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【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R543.5

【參考文獻】

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1 肖星;潘旭東;馬愛軍;吳梅;楊紹楠;王婷;孫清琳;楊淑娜;王蘭;;微小RNA對內皮細胞炎性反應過程中血管內皮細胞黏附分子1表達的影響[J];中華老年心腦血管病雜志;2016年05期

2 周林林;郭樂;湯建中;張愛君;劉學英;徐廣賢;;miR-144通過靶向Atg4a調控卡介苗和雷帕霉素誘導的RAW264.7細胞自噬[J];細胞與分子免疫學雜志;2015年02期

3 郝鳳成;蘇中華;;自噬在ox-LDL誘導炎癥反應中的保護作用[J];山東大學學報(醫(yī)學版);2014年04期

4 ;Neuronal autophagy in cerebral ischemia[J];Neuroscience Bulletin;2012年05期

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本文編號：2440539