【摘要】：心肌細胞是研究心血管疾病的重要工具之一,但是人類心肌細胞較難獲得和培養(yǎng).為人類胚胎干細胞誘導分化成心肌細胞提供一個有用的實驗方法和鑒定方案.人胚胎干細胞以其多向分化的特性為體外研究提供了細胞資源.在人胚胎干細胞誘導分化為心肌細胞的過程中,通過熒光定量聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)檢測發(fā)現(xiàn),在分化過程中干細胞標記物Cripto,Dnmt3b,Wnt3,KIF4,Oct4,SOX2和Nanog表達下降,心肌特異性結(jié)構(gòu)蛋白cTnT和α-actinin以及心臟前體細胞分化標記物Nkx2.5表達上升.分化完成后用免疫熒光檢測心肌特異性結(jié)構(gòu)蛋白Tnn T2和α-actinin,通過分析Tnn T2陽性細胞的比例,α-actinin陽性細胞的比例,以及Tnn T2和α-actinin雙陽性細胞的比例發(fā)現(xiàn),在所提出的胚胎干細胞誘導分化體系中,三者比例分別為90.80%,91.00%,90.91%,表明在此誘導分化條件下人胚胎干細胞可成功分化成為心肌細胞.成功建立了人胚胎干細胞來源的心肌細胞模型以及基于標記物熒光定量PCR及免疫熒光系統(tǒng)檢測的鑒定方案,為未來心血管疾病的基礎研究及心臟毒性藥物檢測奠定了一定的基礎.
[Abstract]:Cardiomyocytes are one of the important tools to study cardiovascular disease, but human cardiomyocytes are difficult to obtain and culture. To provide a useful experimental method and identification scheme for human embryonic stem cells to differentiate into cardiomyocytes. Human embryonic stem cells provide cell resources for the study in vitro because of their multidirectional differentiation. In the process of inducing human embryonic stem cells to differentiate into cardiomyocytes, the expression of Cripto,Dnmt3b,Wnt3,KIF4,Oct4,SOX2 and Nanog, the markers of stem cells, decreased in the process of differentiation by fluorescence quantitative polymerase chain reaction (polymerase chain reaction,PCR). The expressions of myocardial specific structural proteins (cTnT and 偽-actinin) and cardiac precursor cell differentiation marker (Nkx2.5) were increased. After differentiation, the ratio of Tnn T2 positive cells, 偽 -actinin positive cells and Tnn T2 and 偽 -actinin double positive cells were detected by immunofluorescence. In the system of inducing differentiation of embryonic stem cells, the ratio of the three was 90.80,91.00 and 90.91respectively, which indicated that human embryonic stem cells could be successfully differentiated into cardiomyocytes under the condition of inducing differentiation. The cardiac myocyte model derived from human embryonic stem cells and the identification scheme based on fluorescent quantitative PCR and immunofluorescence system were successfully established. It will lay a foundation for the future basic research of cardiovascular disease and the detection of cardiac toxic drugs.
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院心臟內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81370280,81570332)
【分類號】：R54

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