【摘要】：目的:從大氣細顆粒物PM2.5對血管內(nèi)皮細胞氧化應激和凋亡的影響,研究PM2.5對血管內(nèi)皮細胞的毒性。方法:體外培養(yǎng)血管內(nèi)皮細胞株EA.hy926,用不同濃度的PM2.5染毒24 h后,用CCK-8法測細胞的活性,用DCFH-DA熒光標記法檢測細胞內(nèi)氧自由基生成情況,用流式細胞術檢測細胞凋亡率,然后用Western blot法檢測凋亡相關蛋白細胞色素C、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表達變化。結果:CCK-8法結果顯示PM2.5對血管內(nèi)皮細胞有明顯的毒性,在濃度大于25 mg/L時可使EA.hy926細胞活性顯著下降;PM2.5染毒24 h后可見DCFH-DA熒光染色增強,說明細胞內(nèi)有大量的氧自由基形成;流式細胞術和Western blot檢測證實PM2.5可以通過上調(diào)細胞色素C表達和活化cleaved caspase-9和cleaved caspase-3而誘導EA.hy926細胞凋亡。此外,用N-乙酰半胱氨酸抑制氧自由基生成可以抑制血管內(nèi)皮細胞凋亡,提示PM2.5引起的細胞凋亡與氧化應激有關。結論:PM2.5可導致血管內(nèi)皮細胞氧化應激水平增強和凋亡增加,這可能是其影響心血管系統(tǒng)功能的機制之一。
[Abstract]:Aim: to study the toxicity of PM2.5 to vascular endothelial cells (VECs) from the effects of atmospheric fine particles (PM2.5) on oxidative stress and apoptosis of vascular endothelial cells (VEC). Methods: cultured vascular endothelial cells (EA.hy926,) were exposed to different concentrations of PM2.5 for 24 h. The activity of the cells was measured by CCK-8 method, the production of oxygen free radicals was detected by DCFH-DA fluorescence labeling method, and the apoptosis rate was detected by flow cytometry. Then the expression of apoptosis-related protein cytochrome cleaved caspase-9 and cleaved caspase-3 was detected by Western blot assay. Results the results of 1% CCK-8 assay showed that PM2.5 had obvious toxicity to vascular endothelial cells. When the concentration was more than 25 mg/L, the activity of EA.hy926 cells was significantly decreased and the fluorescence staining of DCFH-DA was enhanced 24 h after exposure to PM2.5, indicating that there were a large number of oxygen free radicals formed in the cells. Flow cytometry and Western blot showed that PM2.5 could induce apoptosis of EA.hy926 cells by up-regulating cytochrome C expression and activating cleaved caspase-9 and cleaved caspase-3. In addition, the inhibition of oxygen free radical production by N-acetylcysteine can inhibit the apoptosis of vascular endothelial cells, suggesting that apoptosis induced by PM2.5 is related to oxidative stress. Conclusion the increase of oxidative stress and apoptosis of vascular endothelial cells induced by 1: PM2.5 may be one of the mechanisms that affect cardiovascular system function.
【作者單位】： 廣東藥科大學基礎學院;廣州中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院;
【基金】：廣東省科技計劃(No.2014A020212266;No.2016A020215156)
【分類號】：R54;X513

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本文編號：2226840