本文選題：P5CS + 純化��； 參考：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：[目的]研究吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)蛋白的純化、人P5CS在心肌組織中的表達、擴張型心臟病、冠心病、先天性心臟病靜脈血中P5CS基因表達與疾病的關(guān)系。[方法]①采集心肌、房間隔進行Western Blot,檢測心臟組織上P5CS的表達情況。②采集擴張型心臟病、冠心病、先天性心臟病患者靜脈血,經(jīng)總DNA提取、PCR擴增后進行基因測序。③采用PCR方法從人肝細胞cDNA文庫獲得編碼人體P5CS基因的2388bp全長編碼區(qū)序列,此片段經(jīng)BamH I及Xho I雙酶切后連接到同樣經(jīng)BamH I及Xho I雙酶切的pET28a(+)載體上,并篩選陽性克隆子。陽性重組子在E. coliBL21(DE3)中經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后進行蛋白表達。[結(jié)果]①人心肌、房間隔組織可以檢測到明顯的P5CS條帶。②所篩選的擴張型心臟病、冠心病、先天性心臟病患者經(jīng)基因測序未發(fā)現(xiàn)P5CS突變位點。③本課題得到的P5CS目的蛋白以包涵體形式存在。[結(jié)論]①心肌、房間隔組織有P5CS蛋白表達。②目前未發(fā)現(xiàn)P5CS與擴張型心臟病、冠心病、先天性心臟病等具有顯著相關(guān)性。③P5CS蛋白在大腸桿菌表達過程中以包涵體形式存在于沉淀中。
[Abstract]:[objective] to study the purification of pyrrolidin-5-carboxylic acid synthase (P5CSA) protein, the expression of P5CS in myocardial tissue, the expression of P5CS gene in the venous blood of patients with dilated heart disease, coronary heart disease and congenital heart disease. [methods] 1Myocardium and atrial septum were collected by Western blot.2 the expression of P5CS in heart tissue was detected. 2. Venous blood samples were collected from patients with dilated heart disease, coronary heart disease and congenital heart disease. The full-length 2388bp coding region of human P5CS gene was obtained from human hepatocyte cDNA library by PCR. The fragment was digested by BamH I and Xho I and ligated to pET28a () vector which was also digested by BamH I and Xho I, and the positive clones were screened. The positive recombinant protein was induced by IPTG and expressed in E. coli BL21 (DE3). [results] in 1 person's myocardium, dilated heart disease, coronary heart disease, and coronary heart disease were detected in atrial septal tissue. In patients with congenital heart disease, there was no P5CS mutation locus. 3. The P5CS target protein was found to exist in the form of inclusion body. [conclusion] 1 there is no P5CS protein expression in myocardium and atrial septum. At present, P5CS is not associated with dilated heart disease and coronary heart disease. There was a significant correlation between congenital heart disease and so on. 3P5CS protein existed in the form of inclusion body in the process of expression of E. coli.
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R54

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本文編號：2021290