本文選題：FⅧ基因　切入點：組蛋白乙酰化　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:通過對人永生化正常肝細(xì)胞LO2中凝血因子Ⅷ(coagulation factor Ⅷ,FⅧ)啟動子區(qū)域組蛋白乙�；腿ヒ阴；难芯�,探索NO信號激活LO2細(xì)胞中FⅧ高表達(dá)的分子機(jī)制。方法:建立L-精氨酸激活人肝細(xì)胞L02內(nèi)源凝血因子FⅧ高表達(dá)的分子細(xì)胞模型。取對數(shù)生長期人類永生化肝細(xì)胞LO2隨機(jī)分為:對照組和L-精氨酸組、組蛋白乙酰化抑制劑組和組蛋白去乙�；种苿┙M。L-精氨酸組(L-精氨酸的終濃度10mM),對照組用同等體積的PBS取代L-精氨酸,組蛋白乙酰化抑制劑組(C646的終濃度25uM),組蛋白去乙�；种苿┙M(SAHA的終濃度50nM),分別培養(yǎng)0h、12h、24h、36h、48h、60h。用RT-PCR方法檢測各組中人FⅧ基因的轉(zhuǎn)錄水平。用染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)分別檢測對照組,L-精氨酸組,組蛋白乙�；种苿┙M,組蛋白去乙酰化抑制劑組FⅧ基因啟動子區(qū)域組蛋白乙�；健�(gòu)建核轉(zhuǎn)錄因子(Nuclear factor kB,NF-kB1)flag標(biāo)簽質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染LO2細(xì)胞。用ChIP檢測NF-kB1與FⅧ基因啟動子區(qū)域轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的結(jié)合能力。結(jié)果:RT-PCR結(jié)果顯示L-精氨酸組和組蛋白去乙�；种苿┙M中FⅧ基因表達(dá)上調(diào),正常組和組蛋白乙酰化抑制劑組中FⅧ基因為本底表達(dá)。ChIP檢測到L-精氨酸組和組蛋白去乙酰化抑制劑組比正常組和組蛋白乙�；种苿┙M中NF-kB1與FⅧ基因啟動子區(qū)域轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的結(jié)合能力強(qiáng),ChIP檢測到對照組和組蛋白乙酰化抑制劑組FⅧ基因啟動子區(qū)域組蛋白乙�；綖楸镜妆磉_(dá),L-精氨酸組和組蛋白去乙酰化抑制劑組FⅧ基因啟動子區(qū)域組蛋白乙�；教岣摺＝Y(jié)論:上述研究表明組蛋白乙�；种苿┠苋∠鸏O2細(xì)胞中內(nèi)源人FⅧ基因的上調(diào),而組蛋白去乙�；种苿┠軈f(xié)同LO2細(xì)胞中內(nèi)源人FⅧ基因的上調(diào)。NO信號在LO2細(xì)胞中通過調(diào)節(jié)FⅧ基因啟動子區(qū)域組蛋白乙酰化水平,招募轉(zhuǎn)錄因子NF-kB1上調(diào)人FⅧ基因的表達(dá)。
[Abstract]:Aim: to study the acetylation and deacetylation of the promoter region of factor 鈪，

本文編號：1670806