本文選題：心肌梗塞　切入點(diǎn)：骨髓　出處：《中國組織工程研究》2017年29期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：背景:課題組前期研究發(fā)現(xiàn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植能夠改善大鼠心肌梗死后心功能,但整體效果并不太理想,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)局部梗死微環(huán)境中的分化效率低下,其向心肌細(xì)胞分化的能力極其有限。目的:采用lncRNA-Bvht體外轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,觀察其對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化的影響。方法:構(gòu)建含lncRNA-Bvht的病毒載體p LVX-IRES-Zs Green1-lncRNA-Bvht,對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行l(wèi)ncRNA-Bvht轉(zhuǎn)染并檢測轉(zhuǎn)染效率。分離培養(yǎng)C57BL/6小鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,并將第3代細(xì)胞分為3組:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組、空載體組和lncRNA-Bvht組。各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h后用5-氮雜胞苷進(jìn)行誘導(dǎo)分化24 h再進(jìn)行正常培養(yǎng)2周,熒光顯微鏡觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化情況,免疫熒光染色、Western blot、qRT-PCR檢測心肌分化標(biāo)記物肌鈣蛋白T和肌節(jié)蛋白的表達(dá)。結(jié)果與結(jié)論:①誘導(dǎo)分化后細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變,細(xì)胞之間形成連接,排列方向趨于一致;②免疫熒光檢測結(jié)果顯示lncRNA-Bvht組肌鈣蛋白T和肌節(jié)蛋白表達(dá)呈現(xiàn)強(qiáng)陽性;肌鈣蛋白T陽性細(xì)胞的比例顯著增加;③qRT-PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示lncRNA-Bvht組肌鈣蛋白T和肌節(jié)蛋白的表達(dá)較空載體組和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組均明顯升高(P0.01);④結(jié)果提示,lncRNA-Bvht轉(zhuǎn)染能夠有效促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外向心肌樣細(xì)胞發(fā)生分化。
[Abstract]:Background: our previous study found that bone marrow mesenchymal stem cell transplantation can improve cardiac function after myocardial infarction in rats, but the overall effect is not very good, the differentiation efficiency of bone marrow mesenchymal stem cells in the microenvironment of local infarction in vivo is low. Its ability to differentiate into cardiomyocytes is extremely limited. Objective: to transfect bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) with lncRNA-Bvht in vitro. Methods: the virus vector p LVX-IRES-Zs Green1-lncRNA-Bvhtcontaining lncRNA-Bvht was constructed to transfect bone marrow mesenchymal stem cells into cardiomyocyte-like cells. LncRNA-Bvht transfection and transfection efficiency were detected. Bone of C57BL / 6 mice was isolated and cultured. Marrow mesenchymal stem cells, The third passage cells were divided into three groups: bone marrow mesenchymal stem cells group, empty carrier group and lncRNA-Bvht group. After 48 h culture, 5-azacytidine was used to induce differentiation for 24 h and then normal culture for 2 weeks. The differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into cardiomyocytes was observed by fluorescence microscope, and the expression of troponin T and ganglion protein, which was the marker of myocardial differentiation, was detected by Western blottqRT-PCR. The expression of troponin T and ganglion protein was strongly positive in lncRNA-Bvht group. The expression of troponin T and ganglion protein in lncRNA-Bvht group was significantly higher than that in blank vector group and bone marrow mesenchymal stem cell group. The results showed that the expression of troponin T and sarcomere protein in lncRNA-Bvht group was significantly higher than that in blank vector group and bone marrow mesenchymal stem cell group. It can effectively promote the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into cardiomyocyte-like cells in vitro.
【作者單位】： 中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院急診科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81070125)“抗凋亡與促血管生成miRNA-378干預(yù)MSCs治療心梗后心衰的機(jī)制研究”;國家自然科學(xué)基金(81270213)“ANGⅡ/AT1/SMAD/CX43通路在心肌干細(xì)胞提高心梗大鼠心電生理學(xué)穩(wěn)定性和室顫閾值的作用機(jī)制研究”;國家自然科學(xué)基金(81670306)“心肌干細(xì)胞經(jīng)IGF-1/STAT/miR-155通路下調(diào)AT1R改善心肌梗死后心電生理穩(wěn)定性機(jī)理研究” 廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014A020211002)“LncRNA-Bvht/MESP1/N-cadherin通路調(diào)控MSCs向心肌細(xì)胞定向分化的機(jī)制研究”;廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2010B031600032)“抗凋亡與促血管生成miRNA-378干預(yù)MSCs治療心梗后心衰的機(jī)制研究” 高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)中山大學(xué)青年教師重點(diǎn)培育項(xiàng)目(13ykzd16)“PPAR-γ/TGF-β1/Smad/CX43通路在PPAR-γ干預(yù)MSCs治療心梗后心衰的療效及機(jī)制研究” 廣東省醫(yī)學(xué)科研基金(A2016264)”心肌干細(xì)胞經(jīng)由HIF-1α/Apelin/APJ/ACE2通路下調(diào)ANGII改善心肌梗死大鼠心電生理學(xué)穩(wěn)定性的機(jī)制研究”~~
【分類號】：R54

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本文編號：1572625