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辣椒素對(duì)高鹽致大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的抑制作用

發(fā)布時(shí)間:2018-02-14 14:32

  本文關(guān)鍵詞: 高鹽 血管平滑肌細(xì)胞 細(xì)胞增殖 辣椒素 出處:《中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志》2017年06期  論文類型:期刊論文


【摘要】:目的研究辣椒素對(duì)高鹽誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)增殖的抑制作用。方法組織貼壁法培養(yǎng)原代大鼠血管平滑肌細(xì)胞,根據(jù)MTT結(jié)果繪制大鼠血管平滑肌細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線,大鼠血管平滑肌細(xì)胞傳至第4代去血清同步化24 h,不同濃度辣椒素(0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L)進(jìn)行高鹽培養(yǎng)72 h,MTT比色法檢測(cè)大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖情況,選取抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖的辣椒素濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。CCK-8檢測(cè)滲透壓對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞增殖周期,免疫熒光染色法和Western blot檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá),實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)瞬時(shí)受體電位家族香草醛1型受體(TRPV1)mRNA的表達(dá),Western blot檢測(cè)瞬時(shí)受體電位家族香草醛1型受體的蛋白表達(dá)。結(jié)果 MTT結(jié)果顯示,辣椒素濃度為10μmol/L時(shí)大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖開(kāi)始受抑制,100μmol/L時(shí)抑制作用增強(qiáng)(P0.05),選取10μmol/L辣椒素進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。CCK-8結(jié)果顯示,高鹽組細(xì)胞明顯增殖,而甘露醇組、正常組和高鹽+辣椒素組無(wú)差異。流式細(xì)胞儀測(cè)得高鹽組G0/G1、G2/M期細(xì)胞比例減少(P0.05),S期細(xì)胞比例增多(P0.05);與高鹽組比較,高鹽+辣椒素組G0/G1、G2/M期細(xì)胞比例增加(P0.05),S期細(xì)胞比例下降(P0.05)。免疫熒光及Western blot結(jié)果顯示,高鹽組增殖細(xì)胞核抗原陽(yáng)性細(xì)胞核增多,蛋白表達(dá)增加(P0.05),而高鹽+辣椒素組增殖細(xì)胞核抗原陽(yáng)性細(xì)胞核減少,蛋白表達(dá)減少(P0.05)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot結(jié)果顯示高鹽組瞬時(shí)受體電位家族香草醛1型受體mRNA及蛋白表達(dá)減少(P0.05),辣椒素組則增加(P0.05)。結(jié)論辣椒素可抑制高鹽所致的大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖,其作用機(jī)制可能與激活瞬時(shí)受體電位家族香草醛1型受體表達(dá)有關(guān)。
[Abstract]:Objective to study the inhibitory effect of capsaicin on the proliferation of rat vascular smooth muscle cells (VSMC) induced by high salt. Methods Primary rat vascular smooth muscle cells (VSMC) were cultured by tissue adherent method and the growth curve of VSMC was plotted according to MTT results. Rat vascular smooth muscle cells (VSMCs) were transferred to the 4th generation and synchronized for 24 h. The proliferation of rat vascular smooth muscle cells (VSMCs) was detected by MTT colorimetric assay at 72 h after high salt culture. The concentration of capsaicin was 0.01 渭 mol / L ~ (0.1 渭 mol / L) and 10 渭 mol / L ~ (10) 渭 mol / L ~ (10 渭 mol / L) respectively. The effect of osmotic pressure on proliferation of vascular smooth muscle cells in rats was detected by CCK-8. Flow cytometry was used to analyze cell proliferation cycle. Immunofluorescence staining and Western blot were used to detect the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA). Real time fluorescence quantitative PCR was used to detect the mRNA expression of vanillin type 1 receptor type 1 receptor in transient receptor potential family. Western blot was used to detect the protein expression of vanillin type 1 receptor family in transient receptor potential family. When the concentration of capsaicin was 10 渭 mol/L, the proliferation of vascular smooth muscle cells in rats was inhibited at 100 渭 mol/L. The results of 10 渭 mol/L capsaicin test. CCK-8 showed that the proliferation of vascular smooth muscle cells in high salt group was obvious, while that in mannitol group was higher than that in mannitol group. There was no difference between normal group and high salt capsaicin group. In high salt capsaicin group, the proportion of G _ 0 / G _ 1 G _ 2 / M phase increased and the proportion of P _ (0.05) / S phase decreased. The results of immunofluorescence and Western blot showed that the number of proliferating cell nuclear antigen positive cells increased in high salt group. Protein expression increased in P0.05, but decreased in high salt capsaicin group. The results of real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot showed that the expression of vanillin type 1 receptor mRNA and protein decreased in high salt group, but increased in capsaicin group. Conclusion capsaicin can inhibit the high salt level. Proliferation of rat vascular smooth muscle cells, The mechanism may be related to the activation of the transient receptor potential family vanillin type 1 receptor expression.
【作者單位】: 遵義醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)研究所心血管病研究所高血壓研究室;遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科;重慶市高血壓研究所;
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81160041;81460077) 貴州省優(yōu)秀科技教育人才省長(zhǎng)專項(xiàng)基金項(xiàng)目[黔省專合字(2012)15號(hào)] 貴州省國(guó)際科技合作計(jì)劃項(xiàng)目[G字(2012)7038號(hào)]
【分類號(hào)】:R544.1

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本文編號(hào):1510920

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