本文關鍵詞： 心房顫動 人心房肌細胞 血管緊張Ⅱ 小電導鈣激活鉀通道 膜片鉗技術　出處：《西南醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:臨床常見的快速性房性心律失常——心房顫動(atrial fibrillation,AF),可并發(fā)于各種心臟病,能引起心功能不良、心室律(率)紊亂、血栓形成。嚴重者導致肺栓塞、腦動脈栓塞,卒中發(fā)病率、病死率上升。房顫的發(fā)病機制極為復雜,導致其治療效果欠佳。弄清房顫的發(fā)病機制,將為房顫的治療提供有力的理論依據。心房電重構是AF的重要發(fā)病機制,表現為:心肌細胞動作電位時程縮短,對頻率順應性降低。心肌細胞的動作電位時程由膜上各種離子通道活動決定,因而離子通道成為預防和治療AF的潛在理想靶點。小電導鈣激活鉀通道(Small Conductance Ca~(2+)-activated K~+channels,SK)在心肌細胞上廣泛表達,心房表達明顯高于心室。該通道對膜電位改變不敏感,但對鈣濃度的改變高度敏感。目前研究證實腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)活性的增強與AF密切關聯。抑制內源性的血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)的作用可防止犬心房快速起搏導致的心房肌有效不應期的縮短,另有研究顯示AngⅡ參與了多種離子通道的電重構過程,AngⅡ還可導致細胞鈣超載。我們推測AngⅡ通過改變胞內鈣濃度影響SK通道電流,從而參與AF的電重構。然而AngⅡ是否對SK通道有調節(jié)作用,及其可能的作用機制目前還不清楚。本實驗采用實時定量PCR技術、免疫印跡技術(Western blotting)檢測人心房肌AT1和AT2受體的基因和蛋白表達變化,采用全細胞膜片鉗技術(Whole-cell patch clamp technique)記錄sk通道,探尋af時sk通道電流的變化及angii對sk通道的調控作用機制,為目前房顫的治療策略提供新的思路。方法:(一)電生理實驗將10例(細胞總數n=16)手術患者的心肌組織按照心電圖的結果和病歷資料分為竇性心律組(sr)4例(細胞總數n=8)和心房顫動組(af)6例(細胞總數n=8)。改良的分離法得到單個人心房肌細胞,采用全細胞膜片鉗技術記錄通道電流。觀察指標(1)人心房肌細胞sk通道基本特點;(2)比較sr組和af組sk通道電流密度及其占混合電流的百分比;(3)angii對sr組和af組sk通道電流的作用。(二)實時熒光定量pcrsr組10例,af組10例。檢測兩組患者心房肌at1r、at2r基因mrna的表達水平。(三)免疫印跡技術sr組13例,af組13例。檢測人心房肌at1r、at2r蛋白的表達變化。結果:(1)sk通道電流的特點人心房肌細胞sk通道電流內向整流,apamin能特異性阻斷該通道。(2)比較兩組sk通道電流在-130mv~-80mv鉗制電壓下,兩組sk通道電流密度差別有統(tǒng)計學意義。在-130mv,sr組:(-2.17±0.16)pa/pf,af組:(-9.26±0.43)pa/pf(nsr=4,naf=3,p0.05);sk通道電流在混合電流中所占的比例sr組:(29.36±2.8)%,af組:(45.35±4.3)%(nsr=4,naf=3,p0.05)。結果顯示,無論是sk通道電流密度還是在混合電流中所占的比例,af組都多于sr組。(3)angii對兩組sk通道電流的作用1μmol/langii可減少兩組sk通道電流密度及其在混合電流中的比例。在-130mv,angii對sk通道電流抑制比為sr組:(22.06±1.6)%,af組:(40.07±1.3)%(nsr=4,naf=5,p0.05),結果顯示angii對sk電流的抑制作用af組大于sr組。(4)兩組at1r,at2r基因mrna的變化sr組AT_1R 2~(-ΔΔCt)值:(0.75±0.28),AF組AT_1R 2~(-ΔΔCt)值(0.50±0.29)(nSR=5,nAF=5,p0.05)。表明AF組AT_1R基因mRNA水平變化無統(tǒng)計學差異;SR組AT2R 2~(-ΔΔCt)值:(1.99±0.56),AF組AT2R 2~(-ΔΔCt)值:(0.73±0.49)(nSR=5,nAF=5,p0.01)表明AF組AT2R基因mRNA水平明顯下調。(5)兩組AT1,AT2受體蛋白表達量的變化SR組的AT_1R蛋白表達量:(0.22±0.08),AF組的AT_1R蛋白表達量(0.13±0.10)(nSR=6,nAF=6,p0.05),表明AF時AT_1R蛋白表達水平無統(tǒng)計學差異;SR組的AT2R蛋白表達量:(0.51±0.12),AF組的AT2R蛋白表達量:(0.19±0.16)(nSR=7,nAF=7,p0.05),表明AF時AT2R蛋白表達水平下調。結論:(1)本實驗記錄到了SK通道電流,證實人心房肌細胞存在SK通道。(2)AF患者心房肌細胞內可能出現鈣離子濃度增加,導致SK通道電流密度增加。(3)AF時,AngⅡ增加更易出現復極化末期膜電位震蕩引發(fā)的心律失常。
[Abstract]:Objective : To study the effect of angiotensin 鈪，

本文編號：1485211