本文關(guān)鍵詞： 心房顫動(dòng) 人心房肌細(xì)胞 血管緊張Ⅱ 小電導(dǎo)鈣激活鉀通道 膜片鉗技術(shù)　出處：《西南醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:臨床常見(jiàn)的快速性房性心律失�！姆款潉�(dòng)(atrial fibrillation,AF),可并發(fā)于各種心臟病,能引起心功能不良、心室律(率)紊亂、血栓形成。嚴(yán)重者導(dǎo)致肺栓塞、腦動(dòng)脈栓塞,卒中發(fā)病率、病死率上升。房顫的發(fā)病機(jī)制極為復(fù)雜,導(dǎo)致其治療效果欠佳。弄清房顫的發(fā)病機(jī)制,將為房顫的治療提供有力的理論依據(jù)。心房電重構(gòu)是AF的重要發(fā)病機(jī)制,表現(xiàn)為:心肌細(xì)胞動(dòng)作電位時(shí)程縮短,對(duì)頻率順應(yīng)性降低。心肌細(xì)胞的動(dòng)作電位時(shí)程由膜上各種離子通道活動(dòng)決定,因而離子通道成為預(yù)防和治療AF的潛在理想靶點(diǎn)。小電導(dǎo)鈣激活鉀通道(Small Conductance Ca~(2+)-activated K~+channels,SK)在心肌細(xì)胞上廣泛表達(dá),心房表達(dá)明顯高于心室。該通道對(duì)膜電位改變不敏感,但對(duì)鈣濃度的改變高度敏感。目前研究證實(shí)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)活性的增強(qiáng)與AF密切關(guān)聯(lián)。抑制內(nèi)源性的血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)的作用可防止犬心房快速起搏導(dǎo)致的心房肌有效不應(yīng)期的縮短,另有研究顯示AngⅡ參與了多種離子通道的電重構(gòu)過(guò)程,AngⅡ還可導(dǎo)致細(xì)胞鈣超載。我們推測(cè)AngⅡ通過(guò)改變胞內(nèi)鈣濃度影響SK通道電流,從而參與AF的電重構(gòu)。然而AngⅡ是否對(duì)SK通道有調(diào)節(jié)作用,及其可能的作用機(jī)制目前還不清楚。本實(shí)驗(yàn)采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)、免疫印跡技術(shù)(Western blotting)檢測(cè)人心房肌AT1和AT2受體的基因和蛋白表達(dá)變化,采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)(Whole-cell patch clamp technique)記錄sk通道,探尋af時(shí)sk通道電流的變化及angii對(duì)sk通道的調(diào)控作用機(jī)制,為目前房顫的治療策略提供新的思路。方法:(一)電生理實(shí)驗(yàn)將10例(細(xì)胞總數(shù)n=16)手術(shù)患者的心肌組織按照心電圖的結(jié)果和病歷資料分為竇性心律組(sr)4例(細(xì)胞總數(shù)n=8)和心房顫動(dòng)組(af)6例(細(xì)胞總數(shù)n=8)。改良的分離法得到單個(gè)人心房肌細(xì)胞,采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄通道電流。觀察指標(biāo)(1)人心房肌細(xì)胞sk通道基本特點(diǎn);(2)比較sr組和af組sk通道電流密度及其占混合電流的百分比;(3)angii對(duì)sr組和af組sk通道電流的作用。(二)實(shí)時(shí)熒光定量pcrsr組10例,af組10例。檢測(cè)兩組患者心房肌at1r、at2r基因mrna的表達(dá)水平。(三)免疫印跡技術(shù)sr組13例,af組13例。檢測(cè)人心房肌at1r、at2r蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果:(1)sk通道電流的特點(diǎn)人心房肌細(xì)胞sk通道電流內(nèi)向整流,apamin能特異性阻斷該通道。(2)比較兩組sk通道電流在-130mv~-80mv鉗制電壓下,兩組sk通道電流密度差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在-130mv,sr組:(-2.17±0.16)pa/pf,af組:(-9.26±0.43)pa/pf(nsr=4,naf=3,p0.05);sk通道電流在混合電流中所占的比例sr組:(29.36±2.8)%,af組:(45.35±4.3)%(nsr=4,naf=3,p0.05)。結(jié)果顯示,無(wú)論是sk通道電流密度還是在混合電流中所占的比例,af組都多于sr組。(3)angii對(duì)兩組sk通道電流的作用1μmol/langii可減少兩組sk通道電流密度及其在混合電流中的比例。在-130mv,angii對(duì)sk通道電流抑制比為sr組:(22.06±1.6)%,af組:(40.07±1.3)%(nsr=4,naf=5,p0.05),結(jié)果顯示angii對(duì)sk電流的抑制作用af組大于sr組。(4)兩組at1r,at2r基因mrna的變化sr組AT_1R 2~(-ΔΔCt)值:(0.75±0.28),AF組AT_1R 2~(-ΔΔCt)值(0.50±0.29)(nSR=5,nAF=5,p0.05)。表明AF組AT_1R基因mRNA水平變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;SR組AT2R 2~(-ΔΔCt)值:(1.99±0.56),AF組AT2R 2~(-ΔΔCt)值:(0.73±0.49)(nSR=5,nAF=5,p0.01)表明AF組AT2R基因mRNA水平明顯下調(diào)。(5)兩組AT1,AT2受體蛋白表達(dá)量的變化SR組的AT_1R蛋白表達(dá)量:(0.22±0.08),AF組的AT_1R蛋白表達(dá)量(0.13±0.10)(nSR=6,nAF=6,p0.05),表明AF時(shí)AT_1R蛋白表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;SR組的AT2R蛋白表達(dá)量:(0.51±0.12),AF組的AT2R蛋白表達(dá)量:(0.19±0.16)(nSR=7,nAF=7,p0.05),表明AF時(shí)AT2R蛋白表達(dá)水平下調(diào)。結(jié)論:(1)本實(shí)驗(yàn)記錄到了SK通道電流,證實(shí)人心房肌細(xì)胞存在SK通道。(2)AF患者心房肌細(xì)胞內(nèi)可能出現(xiàn)鈣離子濃度增加,導(dǎo)致SK通道電流密度增加。(3)AF時(shí),AngⅡ增加更易出現(xiàn)復(fù)極化末期膜電位震蕩引發(fā)的心律失常。
[Abstract]:Objective : To study the effect of angiotensin 鈪，

本文編號(hào)：1485211