本文關(guān)鍵詞：熱休克蛋白65對T細胞中蛋白酪氨酸激酶Lck的活性及逆膽固醇轉(zhuǎn)運的影響及其機制研究

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【摘要】：研究背景動脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)是一個以血管內(nèi)皮細胞損傷、血脂代謝異常為基礎、以血管慢性炎癥為特征的病理過程,可引發(fā)心肌梗死、腦梗死等嚴重危害人類健康和生命的疾病。近年來研究表明高密度脂蛋白(high density lipoprotein cholesterol, HDL)功能較血漿HDL-C水平更能準確反映AS及冠心病發(fā)生風險,并且已有研究證實冠心病患者中HDL為失功能HDL,具有促AS作用。HDL是一個復雜的多功能蛋白復合體,可通過其促進膽固醇逆轉(zhuǎn)運(reverse cholesterol transport, RCT)、抗炎、抗氧化、抗血栓形成、增強內(nèi)皮功能、改善糖尿病的血糖控制情況以及抑制造血干細胞增殖等多種功能發(fā)揮抗AS作用。巨噬細胞膽固醇流出率可獨立于HDL-C水平更好地預測AS及冠心病發(fā)生風險,可作為評估HDL功能的一個金指標。2014年發(fā)表在新英格蘭雜志的人群隊列研究中表明：膽固醇流出率作為代表逆膽固醇轉(zhuǎn)運的新的生物標志物,與心血管事件發(fā)生呈負相關(guān)。AS病灶內(nèi)存在著大量的免疫活性細胞—T淋巴細胞,這些免疫細胞激活后會釋放活性酶、細胞因子等,從而誘導血管壁炎癥反應。研究發(fā)現(xiàn),隨著AS進展,T淋巴細胞和巨噬細胞、平滑肌細胞一樣增殖,在AS損傷及斑塊中的含量增加。熱休克蛋白65(heat shock protein65, HSP65)作為分枝桿菌主要抗原之一,具有很強的免疫原性,而且在感染機體時高度表達,并被免疫系統(tǒng)識別。大量研究發(fā)現(xiàn),菌源HSP65含有多重T細胞表位,可以和自身HSP65發(fā)生交叉免疫反應,引發(fā)強烈的細胞免疫。此外,AS斑塊中的T淋巴細胞也可以識別HSP65,并發(fā)生免疫反應,使輔助性T細胞功能失衡,而活化的T淋巴細胞作為效應細胞可分泌趨化因子聚集肥大細胞、巨噬細胞和平滑肌細胞,也可決定B細胞和單核細胞的分化和功能,促進AS的發(fā)生發(fā)展。淋巴細胞特異性蛋白質(zhì)酪氨酸激酶(Lymphocyte-specific protein tyrosine kinase, Lck)是一種在T細胞中表達的Src家族的細胞質(zhì)酪氨酸激酶,在T細胞活化過程中起關(guān)鍵作用。T細胞活化之前,Lck首先通過N-末端的胱氨酸與CD4和CD8復合受體形成非共價鍵。T細胞和抗原呈遞細胞的相互作用會導致Lck活化,隨之可引起磷脂酶Cγ1(phospholipase C, PLCγ1)的酪氨酸磷酸化而活化后,即可裂解胞膜的磷脂而產(chǎn)生1,4,5-三磷酸肌醇(insositol 1,4,5-trisphosphate, IP3)和1,2-二�；视�(diacylgycerol, DAG),進一步通過IP3—Ca2+及DAG—蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)這兩個重要的信號轉(zhuǎn)導環(huán)節(jié),經(jīng)核轉(zhuǎn)錄因子κB (nuclear factor-κB,NF-κB)引起T細胞活化。其中,PKC激活及游離鈣升高在AS發(fā)生、發(fā)展過程中有及其重要的作用。另外,Lck還可激活絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activited protein kinases, MAPK)家族信號轉(zhuǎn)導通路,通過其下游的AP-1、Fos、c-Jun分子發(fā)揮作用。有關(guān)HDL拮抗動脈粥樣硬化的機制,研究較多的是它的促膽固醇逆轉(zhuǎn)運、抗炎和抗氧化功能。另一方面,近些年來越來越多的資料證實,免疫細胞可反過來直接影響HDL介導的脂質(zhì)代謝。T細胞激活后可通過氧甾酮代謝酶、淋巴毒素、MAPK家族成員等通路抑制膽固醇轉(zhuǎn)運蛋白的表達,使細胞膽固醇轉(zhuǎn)出率降低。因此,結(jié)合國內(nèi)外研究表明：免疫炎癥反應可影響淋巴細胞膽固醇轉(zhuǎn)運蛋白及膽固醇流出率；我們的前期研究也表明：HSP65介導的免疫反應可通過損害HDL功能及抑制膽固醇流出而促進AS的發(fā)生發(fā)展。但HSP65是否對T細胞的脂質(zhì)代謝有影響,是否通過調(diào)控Lck及其下游信號通路而影響逆膽固醇轉(zhuǎn)運過程還未得到證實。研究目的本研究在人T淋巴細胞(Jurkat細胞)水平評估不同劑量HSP65對細胞免疫活化及逆膽固醇轉(zhuǎn)運的影響,同時運用慢病毒shRNA-Lck基因沉默探索HSP65作用的下游基因及其功能表達,明確HSP65影響T細胞逆膽固醇轉(zhuǎn)運的作用機制。研究方法1、不同濃度HSP65對細胞增殖能力、Lck蛋白活化及炎癥因子分泌的影響：實驗分組：1)正常對照組,2)HSP65 0.25μg/ml組,3) HSP65 0.5μg/ml組,4) HSP65 0.75μg/ml組,5) HSP65 1μg/ml組；采用CCK-8檢測細胞在450nm處的吸光度,ELISA檢測細胞上清中細胞因于IFN-γ、IL-10的濃度,Western blot檢測酪氨酸激酶Lck蛋白表達情況。2、HSP65對細胞膽固醇流出率、膽固醇轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白及mRNA表達的影響：實驗分組：1)正常對照組,2) HSP65 0.25μg/ml組,3) HSP65 0.5μg/ml組,4) HSP65 0.75μg/ml組,5) HSP65 1μg/ml組；通過放射性同位素標記法來檢測各組樣品的膽固醇流出率；提取細胞蛋白,Western blot檢測膽固醇轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白表達情況；RT-PCR檢測五個膽固醇相關(guān)轉(zhuǎn)運子ABCA1、ABCG1、SR-BI、PPAR-γ、LXR-αmRNA表達水平。3、慢病毒shRNA-Lck轉(zhuǎn)染Jurkat細胞后Lck在基因及蛋白水平的改變：實驗分組：1)正常對照組(Jurkat),2)陰性對照組(NC),3) shRNA-Lck干擾組1(LV1),4) shRNA-Lck干擾組2(LV2)；將含有不同靶序列的基因片段以慢病毒為載體進行包裝與滴度測定后干擾細胞。通過篩選出細胞最佳MOI(50)及感染條件：按照配制好的各組病毒稀釋液,加入各組孔中,200u1/孔；加入配制好的Polybrene稀釋液100u1/孔,使得孔內(nèi)終體積為1ml,Polybrene作用終濃度為5ug/ml;培養(yǎng)8h后,更換培養(yǎng)液,分別于轉(zhuǎn)染操作12h、24h、48h、72h后于熒光倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀況,72h時使用流式細胞儀測GFP熒光細胞轉(zhuǎn)染效率。之后,收集各組細胞,通過real time-PCR和Western blot檢測酪氨酸激酶Lck在基因及蛋白水平的表達情況。4、慢病毒shRNA-Lck轉(zhuǎn)染Jurkat細胞對Lck下游信號通路及逆膽固醇轉(zhuǎn)運功能的影響：實驗分組：1)正常對照組(Jurkat),2)陰性對照組(NC),3) shRNA-Lck干擾組1(LV1),4) shRNA-Lck干擾組2(LV2)；通過Fluo-3/AM激光共聚焦掃描法檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度；[3H]放射性同位素標記檢測各組樣品的膽固醇流出率；油紅O染色檢測細胞內(nèi)脂滴含量；高效液相色譜法檢測細胞內(nèi)膽固醇酯含量。5、慢病毒shRNA-Lck轉(zhuǎn)染Jurkat細胞對Lck下游信號通路蛋白及膽固醇轉(zhuǎn)運蛋白的影響：實驗分組：1)正常對照組(Jurkat),2)陰性對照組(NC,3) shRNA-Lck干擾組1(LV1),4) shRNA-Lck干擾組2(LV2)；通過Western blot檢測Lck下游通路蛋白ERK1/2、JNK通路磷酸化,PKC-γ及NF-κB蛋白水平；檢測膽固醇轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白ABCA1、ABCG1、SR-BI、PPAR-γ和LXR-α表達情況。6、shRNA-Lck轉(zhuǎn)染對1μg/ml HSP65誘導下Jurkat細胞的Lck下游信號通路及逆膽固醇轉(zhuǎn)運的影響：實驗分組：1)1μg/ml HSP65組,2)NC+1μg/ml HSP65組,3)LV1+1μg/ml HSP65組,4) LV2+1μg/ml HSP65組；通過Fluo-3/AM激光共聚焦掃描檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度,Western blot檢測Lck下游通路蛋白表達情況(ERK1/2、JNK蛋白磷酸化,PKC-γ及NF-κB蛋白表達水平)；[3H]放射性同位素標記檢測各組樣品的膽固醇流出率；Western blot檢測脂質(zhì)轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白表達情況；油紅O染色檢測細胞內(nèi)脂滴含量；高效液相色譜法檢測細胞內(nèi)膽固醇酯含量。7、統(tǒng)計學處理所有計量資料均以均數(shù)±標準差(x±s)表示,并采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行兩樣本均數(shù)比較的獨立樣本t檢驗分析,多組間總體均數(shù)比較,在方差齊時采用單向方差分析(one-way ANOVA),方差不齊時采用Welch校正檢驗。多個樣本均數(shù)間的多重比較方差齊時采用LSD法檢驗,方差不齊時采用Dunnett's T3檢驗,P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。研究結(jié)果1、HSP65可促進Jurkat細胞增殖,活化Lck蛋白表達,使IFN-γ分泌增加、IL-10分泌減少,在本實驗的濃度范圍內(nèi)呈濃度依賴性用不同濃度HSP65 (0、0.25、0.5、0.75、1μg/ml)刺激Jurkat細胞后,各組之間整體比較,不同組間細胞增殖能力呈顯著性差異(F=90.513,P0.001)。與正常對照組相比,0.25μg/ml組、0.5μg/ml HSP65組、0.75μg/ml HSP65組和1μg/ml HSP65組在450nm處的吸光度均明顯升高(P0.001),差異有統(tǒng)計學意義。不同組間Lck蛋白表達量隨HSP65濃度梯度增高逐漸增強。與正常對照組(0.89±0.22)比較,0.75μg/ml HSP65組Lck蛋白表達量(1.69±0.16)升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),1μg/ml HSP65組Lck蛋白表達量(1.90±0.83)顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。不同濃度HSP65可以使促炎因子IFN-γ分泌增加,抑炎因子IL-10分泌減少。不同濃度HSP65對Jurkat細胞上清中IFN-γ的分泌作用與正常對照組(15.59±0.86)相比均具有顯著統(tǒng)計學差異(P0.001)。與0.25μg/ml組(17.58±0.89)相比,0.5μg/ml HSP65組(18.76±1.08)升高,差異有統(tǒng)計學差異(P0.05)；與0.75μg/ml組相比,1μg/ml組(25.02±0.98)升高,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.001)。與正常對照組(21.86±0.92)相比,隨著藥物濃度的升高,HSP65對細胞上清中IL-10的作用逐漸減弱,結(jié)果均具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。與0.25μg/ml組(19.89±1.249)相比,0.5μg/ml HSP65組(17.07±1.28)降低,差異有統(tǒng)計學差異(P=0.001)。通過此實驗證明HSP65能活化增殖T細胞,促使T細胞分化(Th1/Th2)功能失衡,具有致AS作用。2、HSP65可抑制膽固醇流出率,下調(diào)膽固醇轉(zhuǎn)運相關(guān)調(diào)節(jié)子(ABCA1、ABCG1、 SR-BI、PPAR-γ、LXR-α)蛋白及mRNA的表達將不同濃度的HSP65 (0、0.25、0.5、0.75、1μg/ml)刺激Jurkat細胞后,與正常對照組(21.27±2.44%)相比,不同HSP65濃度刺激組膽固醇流出率明顯降低(膽固醇流出率分別為15.56±2.58%,14.36±1.42%,12.96±2.45%和10.69±2.03%)(P0.001),且在實驗濃度范圍內(nèi)成劑量依賴性,具有顯著性差異。與正常對照組比較,此實驗中HSP65刺激效應在1μg/ml濃度時膽固醇流出率降低最為明顯,故此后續(xù)實驗均采用1μg/ml濃度進行細胞干預。上述實驗結(jié)果已經(jīng)證實HSP65對膽固醇轉(zhuǎn)出功率的影響,因此在本實驗中我們著重觀察HSP65對膽固醇轉(zhuǎn)運蛋白表達的調(diào)節(jié)機制：給予不同濃度HSP65處理細胞后,ABCA1、ABCG1、SR-BI、PPAR-γ和LXR-α五個蛋白各自組間差異顯著(F=15.615,P0.001；F=18.069,P0.001；F=5.212,P0.05；F=8.426,P0.05；F=40.369,P0.001)。與正常對照組比較,HSP65可明顯下調(diào)了ABCA1、 ABCG1、SR-BI、PPAR-γ及LXR-α五個轉(zhuǎn)運蛋白的表達水平,且在實驗濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴效應,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與正常對照組比較,0.25μg/ml HSP65組ABCG1、PPAR-γ和LXR-α mRNA表達量均明顯降低(P0.05),差異有統(tǒng)計學意義；而0.25μg/ml HSP65組ABCA1和SR-BI mRNA表達量與對照組相比較無明顯差異(P0.05),差異無統(tǒng)計意義；與正常對照組比較,0.5μg/ml HSP65組ABCA1,ABCG1,SR-B1,PPAR-γ和LXR-α mRNA表達量均明顯降低(P0.05),差異有統(tǒng)計意義。通過此實驗發(fā)現(xiàn)了在此濃度范圍內(nèi)的HSP65能明顯降低免疫細胞的膽固醇流出率,下調(diào)膽固醇轉(zhuǎn)運蛋白及基因表達,但具體是通過哪些信號通路介導,是否與免疫活化反應有關(guān),還需要進一步證實。3、慢病毒shRNA-Lck可明顯沉默細胞的Lck基因表達,下調(diào)Lck蛋白表達上述實驗證實HSP65作用于Jurkat細胞后,酪氨酸激酶Lck的蛋白表達量會隨著濃度的增加而逐漸增強,說明HSP65刺激細胞能活化Lck,因此在本實驗中,我們構(gòu)建了兩個不同靶序列基因片段,以慢病毒為載體(shRNA)來沉默Lck基因表達,旨在研究Lck是否介導HSP65引起的逆膽固醇轉(zhuǎn)運功能改變及其作用機制。與陰性對照組比較,LV1組與LV2組Lck蛋白表達均降低(P0.05),差異有統(tǒng)計學意義。與上述結(jié)果相似,與陰性對照組比較,LV1組與LV2組Lck mRNA表達量均明顯降低(P0.001),差異有顯著統(tǒng)計學意義。4、慢病毒shRNA-Lck既可抑制細胞內(nèi)鈣離子含量,又可促進逆膽固醇轉(zhuǎn)運過程與陰性對照組相比,LV1組細胞內(nèi)鈣離子濃度(99.91±7.75,P0.001)顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義,LV2組細胞內(nèi)鈣離子濃度(108.15±11.75,P0.001)降低,差異有統(tǒng)計學意義。為了明確Lck是否參與免疫細胞的逆膽固醇轉(zhuǎn)運過程,我們對采用shRNA-Lck基因沉默后的細胞檢測膽固醇轉(zhuǎn)出率。與陰性對照組(19.08±0.63%)比較,LV1組膽固醇流出率明顯升高(23.46-±1.53%,P0.001),LV2組膽固醇流出率明顯升高(25.27±2.01%,P0.001),均具有顯著性差異。作為評價細胞膽固醇轉(zhuǎn)出率的間接指標,我們檢測了細胞內(nèi)脂滴及膽固醇酯含量。通過油紅O染色測定細胞胞漿內(nèi)脂滴含量,經(jīng)Image J軟件相對定量(總脂滴含量/細胞體積)后結(jié)果：與陰性對照組(0.15±0.01%)比較,LV1組細胞內(nèi)脂滴含量(0.09±0.02%,P0.05),差異不具有統(tǒng)計學意義；LV2組細胞內(nèi)脂滴含量明顯降低(0.07±0.05%,P0.05),具有顯著性差異。通過高效液相色譜法測定細胞內(nèi)膽固醇酯含量/細胞內(nèi)總膽固醇含量,結(jié)果顯示：與陰性對照組(0.50±0.02)相比,LV1組(0.30±0.04)與LV2組(0.32±0.02)細胞內(nèi)膽固醇酯相對含量均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。以上實驗結(jié)果提示：Lck在T細胞逆膽固醇轉(zhuǎn)運中發(fā)揮著重要作用。5、shRNA-Lck可下調(diào)Lck下游通路蛋白的表達,上調(diào)膽固醇轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白的表達上一步的實驗結(jié)果已經(jīng)證實Lck對細胞免疫通路及逆膽固醇轉(zhuǎn)運通路均存在影響,因此在本實驗中我們著重觀察Lck具體是通過下游哪些通路蛋白對膽固醇轉(zhuǎn)運蛋白進行調(diào)節(jié)。我們分別將兩段帶有Lck干擾片段的慢病毒載體轉(zhuǎn)染細胞72h后,分別提取各組蛋白,檢測DAG下游蛋白PKC-γ表達,MAPK家族成員ERK1/2、JNK磷酸化水平,及核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活性。結(jié)果顯示：兩個靶序列的RNA干擾片段均明顯下調(diào)了ERK1/2、JNK、PKC-γ和NF-κB四個蛋白的表達水平。與陰性對照組相比,LV1組與LV2組PKC-γ蛋白表達含量降低,差異均有統(tǒng)計學差異(P0.05)；ERK1/2和.JNK磷酸化水平、NF-κB三個蛋白各自組間差異顯著(F=24.248,P0.001；F=69.837,P0.001；F=20.62,P0.001)。與陰性對照組比較,LV1組ABCA1和ABCG1蛋白表達量明顯升高(P0.05),均具有顯著性差異,而SR-BI、PPAR-γ和LXR-α組間比較無明顯差異(P0.05)無統(tǒng)計學意義；LV2組ABCA1、ABCG1、SR-BI、PPAR-γ和LXR-α蛋白表達量明顯升高(P0.05),具有顯著性差異。綜上實驗結(jié)果及國外研究提示：Lck可能通過下游ERK1/2、JNK、NF-κB等信號蛋白通路,抑制膽固醇相關(guān)轉(zhuǎn)運蛋白,從而下調(diào)逆膽固醇轉(zhuǎn)運功能。6、HSP65通過Lck及其下游信號蛋白發(fā)揮抑制逆膽固醇轉(zhuǎn)運功能為了進一步觀察上一部分實驗結(jié)果討論的Lck及其下游信號通路是否參與HSP65促進細胞免疫活化的效應,我們在Lck基因沉默后,給予1μg/ml HSP65刺激24小時。與NC+1μg/ml HSP65組(240.47±13.63)相比,LV1+1μg/ml HSP65組(128.86±10.26)與LV2+1μg/ml HSP65組(127.20±13.19)細胞內(nèi)鈣離子濃度均顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.001)。與NC+1μg/ml HSP65組相比,LV1+1μg/ml HSP65組與LV2+1μg/ml HSP65組PKC-γ蛋白表達含量、ERK1/2和JNK磷酸化水平及NF-κB四個蛋白各自組間差異顯著(P0.05；P0.05；P0.001；P0.001)。以上研究表明：HSP65介導的T細胞免疫活化反應是由Lck及其下游信號通路介導。為進一步觀察Lck及其下游信號通路是否參與HSP65抑制細胞中逆膽固醇轉(zhuǎn)運的效應,我們在Lck基因沉默后,給予1μg/ml HSP65刺激24小時。與NC+1μg/ml HSP65組(10.83±1.23%)比較,LV1+1μg/ml HSP65組(17.89±2.39%)及LV2+1μg/ml HSP65組(17.76±1.33%)膽固醇流出率均明顯升高(P0.001),具有顯著的統(tǒng)計學差異。通過油紅O染色測細胞內(nèi)脂滴含量,發(fā)現(xiàn)：與NC+1μg/ml HSP65組(0.22±0.04%)比較,LV1+1μg/ml HSP65組(0.11±0.05%)細胞胞漿內(nèi)脂滴含量明顯降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),LV2+1μg/ml HSP65組(0.12±0.04%)細胞內(nèi)脂滴含量降低,具有顯著性差異(P0.05)。通過高效液相色譜法測定細胞內(nèi)膽固醇酯含量/細胞內(nèi)總膽固醇含量,結(jié)果顯示：與NC+1μg/ml HSP65組(0.66±0.01)相比,LV1+1μg/ml HSP65組(0.40±0.03)與LV2+1μg/ml HSP65組(0.41±0.01)細胞內(nèi)膽固醇酯相對含量均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與NC+1μg/ml HSP65組比較,LV1+1μg/ml HSP65組ABCA1、ABCG1、SR-BI、PPAR-γ和LXR-α蛋白表達量明顯升高(P0.05),均具有統(tǒng)計學差異；LV2+1μg/ml HSP65組ABCA1和SR-BI蛋白表達量明顯升高(P0.05),具有顯著性差異,而ABCG1、PPAR-γ和LXR-α組間比較未見明顯變化,差異不具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。綜上實驗結(jié)果表明：HSP65能抑制RCT,Lck活性在此過程中起著重要作用。結(jié)論1.HSP65在濃度范圍內(nèi)(0-1μg/ml)可誘導T細胞增殖,活化蛋白酪氨酸激酶Lck,誘導促炎因子IFN-γ分泌,抑制抗炎因子IL-10分泌。2.HSP65誘導免疫炎癥反應的同時損害了HDL的逆膽固醇轉(zhuǎn)運功能,可降低T細胞膽固醇流出率,下調(diào)細胞ABCA1,ABCG1,SR-B1,PPAR-γ和LXR-α的表達,且隨著HSP65劑量的增加,對逆膽固醇轉(zhuǎn)運功能的影響愈加明顯。3.構(gòu)建的兩段不同的Lck基因靶序列均能成功地在受感染細胞中表達,并能特異且高效抑制Lck蛋白的表達,從而下調(diào)其下游相關(guān)信號分子的表達。4.RNAi技術(shù)阻斷Lck活化后,能增強逆膽固醇轉(zhuǎn)運通道蛋白水平,提高細胞內(nèi)膽固醇流出率,進而降低細胞內(nèi)膽固醇酯含量。5.HSP65通過活化Lck既能促進TCR介導的免疫信號通路,又能抑制T細胞的逆膽固醇轉(zhuǎn)運過程。6.通過本研究及以前資料我們得出總結(jié)論：HSP65通過Lck及其下游免疫信號通路抑制T細胞的逆膽固醇轉(zhuǎn)運功能。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R543.5

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中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 湖南醫(yī)專附屬湘東醫(yī)院 黎國器;膽固醇——動脈粥樣硬化的危險因素[N];大眾衛(wèi)生報;2000年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 牛天貴;食品中膽固醇微生物轉(zhuǎn)化機理與應用研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2000年

2 石蕓;膽固醇與Aβ生成關(guān)系的研究[D];河北醫(yī)科大學;2011年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李靜;禽蛋膽固醇檢測方法的研究及應用[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2013年

2 肖志劍;膽固醇-β-環(huán)糊精包合物釋放膽固醇的試驗研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2002年

3 任兵興;高膽固醇海產(chǎn)品對動物脂質(zhì)代謝的影響研究[D];中國海洋大學;2010年

4 劉宇;炎癥對C57BL/6J小鼠肝臟膽固醇積聚及纖維化的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2013年

5 羅甜甜;熱休克蛋白65對T細胞中蛋白酪氨酸激酶Lck的活性及逆膽固醇轉(zhuǎn)運的影響及其機制研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

6 陳娟;COX-2 shRNA對HSC甘油三酯、膽固醇、維生素A代謝的影響[D];南華大學;2011年

7 張海娟;β-環(huán)糊精包合脫除黃油膽固醇的研究[D];江南大學;2011年

8 陳昱楊;炎癥干擾細胞內(nèi)膽固醇外排導致肝臟脂質(zhì)異常積聚的分子機制[D];重慶醫(yī)科大學;2011年

9 李海麗;STZ大鼠肝膽固醇代謝相關(guān)基因mRNA表達變化的研究[D];河北醫(yī)科大學;2007年

10 池雪林;中草藥飼料添加劑降低雞蛋膽固醇的研究[D];福建農(nóng)林大學;2005年

本文編號：1213188