本文關(guān)鍵詞：小鼠酒精性心肌病相關(guān)microRNA表達譜分析

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【摘要】：酒精性心肌病是由于長期過量飲酒所導(dǎo)致的慢性心功能障礙,并逐步發(fā)展為擴張型心肌病,目前發(fā)病率逐年增長,社會危害嚴重,而人們對參與酒精性心肌病發(fā)展的microRNA的作用機制和方式等還不清楚。因此,在本研究中,我們將通過基因芯片分析1microRNA在正常和酒精性心肌中的表達譜變化,結(jié)合生物信息學(xué)預(yù)測,尋找和明確microRNA參與酒精性心肌病變的線索；利用microRNA分子生物學(xué)研究方法,初確認microRNA對小鼠心肌的調(diào)控作用,為闡明microRNA在心臟發(fā)育、心肌肥厚、心律失常、心肌纖維化及心肌細胞凋亡和心力衰竭等心臟生理和病理生理過程中的功能作用提供新的理論依據(jù),為將來心血管疾病防治提供新的思路和治療策略。 研究目的 (1)通過飼喂酒精的方法建立小鼠酒精性心肌病模型； (2)利用microRNA芯片篩選小鼠酒精性心肌病病變相關(guān)microRNA,以期發(fā)現(xiàn)酒精性心肌病心肌病變的分子基礎(chǔ)； (3)應(yīng)用Real-Time PCR技術(shù)對差異表達的microRNA進行分子生物學(xué)驗證； 研究方法 50只雄性昆明種小鼠,重量15-20g,隨機分為對照組(n=20)和酒精性心肌病實驗組(n=30)。所有動物由昆明醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供。實驗組小鼠經(jīng)每日飲用4%乙醇12周制作酒精性心肌病模型,對照組則每日飲用等量生理鹽水。通過上述方法建立小鼠酒精性心肌病模型,模型成功建立后取出小鼠心臟,做病理切片并送病檢,HE染色后光學(xué)顯微鏡觀察心肌細胞形態(tài)學(xué)改變；在第12周確認模型建立成功后取小鼠心臟組織,用Trizol法提取心肌組織總RNA,采用基因芯片技術(shù)檢測1miRNA的表達,利用GenePix Pro6.0軟件分析、并挑選差異表達的miRNA,然后應(yīng)用miRNA熒光定量PCR試劑盒證實該種特異性表達的1miRNA確實在酒精性心肌病心肌組織中有差異性表達變化,并且對該差異性表達的1niRNA進行相對定量分析。 研究結(jié)果 (1)與對照組相比,解剖發(fā)現(xiàn),實驗組小鼠左心室、室間隔增厚顯著,實驗組心臟未見明顯大于正常組。病理結(jié)果顯示,實驗組心肌細胞增大、部分心肌細胞水腫并且細胞排列不整齊： (2) miRNA芯片結(jié)果分析發(fā)現(xiàn),mmu-miR-X1, mmu-miR-X2, mmu-miR-X3在酒精性心肌病的實驗組表達量明顯高于對照組,實時熒光定量PCR也證實mmu-miR-X1, mmu-miR-X2, mmu-miR-X3等在酒精性心肌病的實驗組表達量明顯高于對照組,與芯片結(jié)果一致；而芯片結(jié)果與實時熒光定量PCR都顯示mmu-miR-X5, mmu-miR-X6, mmu-miR-X7, mmu-miR-X8, mmu-miR-X9, mmu-miR-X10, mmu-miR-X11, mmu-miR-X12在實驗組心肌表達下降。 結(jié)論 (1)酒精性心肌病小鼠心肌組織與正常的心肌組織相比,miRNA存在差異性表達； (2)小鼠酒精性心肌病心肌組織病變相關(guān)miRNA有mmu-miR-X1, mmu-miR-X2, mmu-miR-X3, mmu-miR-X5, mmu-miR-X6, mmu-miR-X7, mmu-miR-X8, mmu-miR-X9, mmu-miR-X10, mmu-miR-X11, mmu-miR-X12。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R542.2

【共引文獻】

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本文編號：1192342