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ox-LDL誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡中PCSK9與炎癥因子的關系以及替格瑞洛干預的影響

發(fā)布時間:2017-10-18 23:16

  本文關鍵詞:ox-LDL誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡中PCSK9與炎癥因子的關系以及替格瑞洛干預的影響


  更多相關文章: 前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9 小分子干擾RNA 凋亡 氧化型低密度脂蛋白 人臍靜脈內(nèi)皮細胞 炎癥因子 替格瑞洛


【摘要】:目的觀察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)凋亡中前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(PCSK9)與炎癥因子表達的關系,以及替格瑞洛(Ticagrelor)干預的影響。方法用50μg/ml的ox-LDL處理HUVECs不同時間(0h,12h,24h,36h,48h),運用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)、酶聯(lián)免疫吸附劑測定(ELISA)的檢測方法分別檢測PCSK9、白細胞介素6(IL-6)、單核細胞趨化蛋白1(MCP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)、C反應蛋白(CRP)的mRNA和蛋白的表達,以及核因子-κB(NF-κB)核位移。應用Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染100nmol/L的PCSK9小分子干擾RNA(PCSK9 siRNA)進入HUVECs 6h后,再加入ox-LDL 50μg/ml處理24h,以RT-PCR、ELISA的方法分別檢測PCSK9、IL-6、MCP-1、MMP-9、CRP的mRNA和蛋白的表達,以及NF-κB核位移。用50μg/ml的ox-LDL及不同濃度的Ticagrelor(40、60μmol/L)處理HUVECs 24h,以RT-PCR、ELISA的方法分別檢測PCSK9、IL-6、MCP-1、MMP-9、CRP的mRNA和蛋白的表達,以及NF-κB核位移。結(jié)果在一定時間范圍內(nèi),隨著ox-LDL處理HUVECs時間的不斷增加,PCSK9、IL-6、MCP-1、MMP-9、CRP的mRNA和蛋白的表達,以及NF-κB核位移逐漸增加(P0.05)。PCSK9 siRNA轉(zhuǎn)染組,PCSK9、IL-6、MCP-1、MMP-9、CRP的mRNA和蛋白的表達,以及NF-κB核位移較陰性轉(zhuǎn)染組(NC)組明顯降低(P0.05)。Ticagrelor能明顯降低PCSK9、IL-6、MCP-1、MMP-9、CRP的mRNA和蛋白的表達,以及NF-κB核位移,呈濃度依賴性(P0.05)。結(jié)論調(diào)亡的HUVECs中存在著PCSK9基因的表達,其表達的程度及炎癥因子釋放的濃度與內(nèi)皮細胞調(diào)亡程度有關;PCSK9 siRNA能夠抑制ox-LDL誘導的HUVECs炎癥因子的表達,PCSK9可能參與了炎癥反應的調(diào)節(jié);Ticagrelor能夠抑制ox-LDL誘導的HUVECs凋亡中PCSK9與炎癥因子的表達,Ticagrelor的抗炎作用可能與其抑制PCSK9的機制有關。
【關鍵詞】:前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9 小分子干擾RNA 凋亡 氧化型低密度脂蛋白 人臍靜脈內(nèi)皮細胞 炎癥因子 替格瑞洛
【學位授予單位】:天津醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2016
【分類號】:R543
【目錄】:
  • 中文摘要4-6
  • Abstract6-10
  • 縮略語/符號說明10-11
  • 前言11-13
  • 研究現(xiàn)狀、成果11-12
  • 研究目的、方法12-13
  • 一、ox-LDL對人臍靜脈內(nèi)皮細胞PCSK9及炎癥因子表達的影響13-26
  • 1.1 對象和方法13-18
  • 1.1.1 實驗材料13
  • 1.1.2 實驗方法13-18
  • 1.2 結(jié)果18-22
  • 1.2.1 流式細胞儀分析測定細胞凋亡率18-19
  • 1.2.2 ox-LDL對人臍靜脈內(nèi)皮細胞PCSK9 mRNA表達的影響19
  • 1.2.3 ox-LDL對人臍靜脈內(nèi)皮細胞IL-6 mRNA和蛋白表達的影響19-20
  • 1.2.4 ox-LDL對人臍靜脈內(nèi)皮細胞MCP-1 mRNA和蛋白表達的影響20
  • 1.2.5 ox-LDL對人臍靜脈內(nèi)皮細胞MMP-9 mRNA和蛋白表達的影響20-21
  • 1.2.6 ox-LDL對人臍靜脈內(nèi)皮細胞CRP mRNA和蛋白表達的影響21
  • 1.2.7 ox-LDL對人臍靜脈內(nèi)皮細胞NF-κB核位移的影響21-22
  • 1.3 討論22-25
  • 1.4 小結(jié)25-26
  • 二、PCSK9 siRNA對人臍靜脈內(nèi)皮細胞PCSK9及炎癥因子表達的影響26-37
  • 2.1 對象和方法26-31
  • 2.1.1 實驗材料26-27
  • 2.1.2 實驗方法27-31
  • 2.2 結(jié)果31-34
  • 2.2.1 PCSK9 siRNA對人臍靜脈內(nèi)皮細胞PCSK9 mRNA表達的影響31
  • 2.2.2 PCSK9 siRNA對人臍靜脈內(nèi)皮細胞IL-6 mRNA和蛋白表達的影響31-32
  • 2.2.3 PCSK9 siRNA對人臍靜脈內(nèi)皮細胞MCP-1 mRNA和蛋白表達的影響32
  • 2.2.4 PCSK9 siRNA對人臍靜脈內(nèi)皮細胞MMP-9 mRNA和蛋白表達的影32-33
  • 2.2.5 PCSK9 siRNA對人臍靜脈內(nèi)皮細胞CRP mRNA和蛋白表達的影響33
  • 2.2.6 PCSK9 siRNA對人臍靜脈內(nèi)皮細胞NF-κB核位移的影響33-34
  • 2.3 討論34-36
  • 2.4 小結(jié)36-37
  • 三、Ticagrelor對人臍靜脈內(nèi)皮細胞PCSK9及炎癥因子表達的影響37-48
  • 3.1 對象和方法37-41
  • 3.1.1 實驗材料37
  • 3.1.2 實驗方法37-41
  • 3.2 結(jié)果41-45
  • 3.2.1 Ticagrelor對人臍靜脈內(nèi)皮細胞PCSK9 mRNA表達的影響41-42
  • 3.2.2 Ticagrelor對人臍靜脈內(nèi)皮細胞IL-6 mRNA和蛋白表達的影響42-43
  • 3.2.3 Ticagrelor對人臍靜脈內(nèi)皮細胞MCP-1 mRNA和蛋白表達的影響43
  • 3.2.4 Ticagrelor對人臍靜脈內(nèi)皮細胞MMP-9 mRNA和蛋白表達的影響43-44
  • 3.2.5 Ticagrelor對人臍靜脈內(nèi)皮細胞CRP mRNA和蛋白表達的影響44
  • 3.2.6 Ticagrelor對人臍靜脈內(nèi)皮細胞NF-κB核位移的影響44-45
  • 3.3 討論45-47
  • 3.4 小結(jié)47-48
  • 結(jié)論48-49
  • 參考文獻49-54
  • 發(fā)表論文和參加科研情況說明54-55
  • 綜述 PCSK9在動脈粥樣硬化中的作用55-63
  • 綜述參考文獻58-63
  • 致謝63

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