發(fā)布時間：2017-10-11 10:46

  本文關鍵詞：槲皮素及1-5-O-槲皮素糖苷對高糖引起內(nèi)皮細胞損傷保護作用的對比研究

  更多相關文章： 槲皮素 1-5-O-槲皮素糖苷 內(nèi)皮細胞 高糖損傷氧化應激

【摘要】：目的:1、構建內(nèi)皮細胞高糖損傷模型并檢測氧化應激的相關指標。2、探索槲皮素(Quercetin,Qu)和1-5-O-槲皮素糖苷(1-5-O-Quercetin Glycoside,1-5-O-QG)能否通過降低氧化應激水平來減輕高糖引起內(nèi)皮細胞損傷的程度并比較兩者的差異。方法:體外培養(yǎng)人血管內(nèi)皮細胞,選取生長狀態(tài)良好的對數(shù)期細胞入組。實驗分4組:①低糖對照組(葡萄糖濃度為5.5 mmol/L+24.5mmol/L甘露醇);②高糖損傷組(葡萄糖濃度為30mmo1/L);③高糖+Qu組(30mmol/L葡萄糖+50μmol/LQu);④高糖+1-5-O-QG組(30mmol/L葡萄糖+50μmol/L1-5-O-QG);在高糖處理前2h加入藥物,培養(yǎng)48小時后對各組進行以下方面檢測:CCK-8檢測各組血管內(nèi)皮細胞活力,測定血管內(nèi)皮細胞的乳酸脫氫酶(LDH)活性、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)水平,DCF-DA法檢測各組細胞ROS水平,qRT-PCR測定還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶4(NADPH oxidase4,NOX4)mRNA、SODmRNA及CATm RNA的水平。結果:(1)血管內(nèi)皮細胞活力高糖組細胞活力明顯低于低糖對照組,有統(tǒng)計學差異(P0.05)。Qu干預組及1-5-O-QG干預組細胞活力均較高糖組升高,且均有統(tǒng)計學意義(P0.05),但兩組細胞活力差異對比無統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)LDH活性與低糖組比較,高糖組的細胞LDH活性高(P0.05),Qu組及1-5-O-QG組的細胞LDH活性均較高糖組下降,且均有統(tǒng)計學意義(P0.05),但兩組細胞LDH活性差異對比無統(tǒng)計學意義(P0.05)。說明Qu及1-5-O-QG均能降低高糖導致的LDH活性增高,且兩者作用程度無差異。(3)SOD活性與低糖組比較,高糖組的細胞SOD的活性低(P0.05),Qu組及1-5-O-QG組細胞的sod的活性均較高糖組升高,且均有統(tǒng)計學意義(p0.05),但兩組細胞sod活性差異對比無統(tǒng)計學意義(p0.05)。說明qu及1-5-o-qg均能緩和高糖導致的sod活性下降,且兩者作用程度無差異。(4)gsh-px活性與低糖組比較,高糖組細胞的谷胱甘肽過氧化物酶活性低(p0.05),qu組及1-5-o-qg組細胞的谷胱甘肽過氧化物酶活性均較高糖組升高(p0.05),但兩組細胞gsh-px活性差異對比無統(tǒng)計學意義(p0.05)。說明qu及1-5-o-qg均能緩和高糖導致的谷胱甘肽過氧化物酶活性的降低,且兩者作用程度無明顯差異。(5)mda的生成水平與低糖組比較,高糖組細胞的mda的生成水平高(p0.05),qu組及1-5-o-qg組細胞mda的生成水平均較高糖組下降,且均有統(tǒng)計學意義(p0.05),但兩組細胞mda生成水平差異對比無統(tǒng)計學意義(p0.05)。說明qu及1-5-o-qg均能降低高糖導致的mda生成水平升高,但兩者作用程度無明顯差異。(6)dcf-da法檢測各組細胞內(nèi)活性氧水平結果:與低糖組比較,高糖組細胞的活性氧水平增高(p0.05),qu組及1-5-o-qg組細胞的活性氧水平均較高糖組降低(p0.05),但兩組細胞內(nèi)活性氧水平差異對比無統(tǒng)計學意義(p0.05)。說明qu及1-5-o-qg均能緩和高糖導致的活性氧水平升高,且兩者作用程度無明顯差異。(7)sodmrna的水平與低糖組比較,高糖組的細胞sodmrna的水平下調(diào)(p0.05),qu組及1-5-o-qg組細胞sodmrna的水平均比高糖組上調(diào)(p0.05),但兩者sodmrna的表達量無明顯差異(p0.05)。qu及qg均能降低高糖導致的細胞sodmrna水平下調(diào)且兩者作用無明顯差異。(8)catmrna的水平與低糖組比較,高糖組的細胞catmrna的水平下調(diào)(p0.05),qu組及1-5-o-qg組細胞catmrna的水平比高糖組上調(diào)(p0.05),但兩者catmrna的水平無明顯差異(p0.05)。qu及1-5-o-qg均能緩和高糖導致的細胞catmrna水平的下調(diào)且兩者作用無明顯差異。(9)nox4mrna的水平與低糖組比較,高糖組的細胞NOX4mRNA的水平上調(diào)(P0.05),Qu組及1-5-O-QG組細胞NOX4mRNA的水平均較高糖組下調(diào)(P0.05),但兩者NOX4mRNA的水平無明顯差異(P0.05)。說明Qu及1-5-O-QG均能降低高糖導致的細胞NOX4mRNA水平的上調(diào)且兩者作用無明顯差異。結論:①槲皮素及1-5-O-槲皮素糖苷均能通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)氧化-抗氧化系統(tǒng)的平衡起到保護高糖引起內(nèi)皮細胞損傷的作用。②Qu及1-5-O-QG的抗氧化清除氧自由基的能力無明顯差異。
【關鍵詞】：槲皮素 1-5-O-槲皮素糖苷 內(nèi)皮細胞 高糖損傷氧化應激
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R543.5
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 實驗材料和方法14-23
• 2.1 實驗材料14-15
• 2.1.1 實驗所用細胞14
• 2.1.2 主要試劑和藥品14-15
• 2.1.3 實驗主要儀器15
• 2.2 試驗方法15-22
• 2.2.1 器材的滅菌、去RNA酶處理15
• 2.2.2 相關液體的配制15-16
• 2.2.3 血管內(nèi)皮細胞株(EC-304血管內(nèi)皮細胞)的的體外培養(yǎng)16-17
• 2.2.4 實驗分組17-18
• 2.2.5 CCK-8 檢測細胞活力18
• 2.2.6 LDH試劑盒測定細胞的LDH活性18
• 2.2.7 SOD試劑盒測定細胞的總SOD活性18-19
• 2.2.8 GSH-Px試劑盒測定細胞的GSH-PX活性19
• 2.2.9 MDA試劑盒測定細胞的MDA水平19
• 2.2.10 DCF-DA法檢測各組細胞內(nèi)活性氧水平19
• 2.2.11 qRT-PCR檢測各組血管內(nèi)皮NOX4、SOD、CAT等mRNA的水平19-22
• 2.3 統(tǒng)計學方法22-23
• 第3章 結果23-34
• 3.1 血管內(nèi)皮細胞（EC304）生長特點23
• 3.2 CCK-8 檢測細胞活力23-24
• 3.3 細胞LDH活性檢測24-25
• 3.4 細胞SOD活性檢測25-26
• 3.5 細胞GSH-Px活性檢測26-27
• 3.6 細胞MDA水平27-28
• 3.7 DCF-DA法檢測細胞內(nèi)ROS水平檢測28-29
• 3.8 qRT-PCR檢測相關基因的轉錄水平29-34
• 3.8.1 SODmRNA水平29-31
• 3.8.2 CATmRNA水平31-32
• 3.8.3 NOX4mRNA水平32-34
• 第4章 討論34-38
• 第5章 結論38-39
• 5.1 結論38
• 5.2 不足與展望38-39
• 致謝39-40
• 參考文獻40-44
• 綜述44-48
• 參考文獻47-48

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 邢影;孫繼澤;牟鳳輝;李文麗;劉銀燕;楊錦竹;;槲皮苷對實驗性高脂血癥大鼠血脂代謝的影響[J];特產(chǎn)研究;2014年02期

2 陳振宇;湯禮軍;;多元醇通路與氧化應激在糖尿病慢性并發(fā)癥中的關系[J];西南軍醫(yī);2014年03期

3 張家瑞;;槲皮苷和山奈酚對糖尿病小鼠血糖及血脂水平的影響[J];現(xiàn)代食品科技;2013年03期

4 胥光熱;彭永權;林靜;劉應才;;槲皮素對人內(nèi)皮祖細胞增殖和凋亡的影響及機制研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2012年10期

5 鐘建青;李波;賈琦;李醫(yī)明;朱維良;陳凱先;;天然黃酮類化合物及其衍生物的構效關系研究進展[J];藥學學報;2011年06期

6 劉倩;葉菲;;己糖胺通路與能量調(diào)節(jié)[J];中國糖尿病雜志;2010年03期

7 肇瑩;張蕾;李會;崔薇薇;任志瑩;;槲皮素抗氧化作用的研究進展[J];雜糧作物;2009年02期

8 李欽;鄭曉亮;陳愛君;張信岳;;槲皮苷防治潰瘍性結腸炎的藥效學研究[J];中國現(xiàn)代應用藥學;2009年03期

9 李沛波;王永剛;吳釘紅;吳忠;蘇薇薇;;田基黃中三個黃酮類化合物保肝退黃作用的實驗研究[J];中山大學學報(醫(yī)學科學版);2007年01期

10 李國,張紅鋒,李義良,王耀發(fā);槲皮素對高糖損傷血管內(nèi)皮細胞的保護作用[J];中藥材;2002年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 黃寶康;桂璇;王國偉;;莽草化學成分及資源開發(fā)利用研究[A];中國醫(yī)藥教育論壇-中國醫(yī)藥教育協(xié)會第三屆三次理事大會暨學術年會論文專輯[C];2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉珊珊;槲皮苷和熊果酸對睡眠內(nèi)源性物質(zhì)影響的研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2008年

，

本文編號：1012093