本文關鍵詞：IBD疾病特異與療效監(jiān)測血清標志物的蛋白質組學篩選初探

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【摘要】：研究背景和目的炎性腸病(Inflammatory Bowel Disease, IBD)是一種慢性腸道炎癥性疾病,包括克羅恩病(Crohn's Disease, CD)和潰瘍性結腸炎(Ulcerative Colitis, UC),臨床表現(xiàn)為反復發(fā)作的腹痛、腹瀉、粘液血便等,嚴重影響患者生活質量。目前臨床上尚無廣泛使用且高效的疾病診斷的血清標記物。糖皮質激素(簡稱激素)通常能夠顯著抑制炎癥,迅速緩解癥狀,但因其不良反應及其無法維持疾病緩解,故難以長期使用。同時部分患者存在激素依賴或激素抵抗,因而尋找激素療效預測指標有著重大的臨床意義。近年來,應用蛋白質組學方法尋找臨床標志物已經(jīng)成為蛋白質組學的核心應用之一。2014年李智立教授課題組使用Native-PAGE、SDS-PAGE和MALDI-FTICR MS方法發(fā)現(xiàn)并證實了新型循環(huán)免疫炎癥相關蛋白復合物(Immunoinflammation-Related Protein Complexes, IIRPCs)能夠作為診斷癌癥的個體化生物標志物。本研究擬在以上研究的基礎上,使用Native-PAGE、SDS-PAGE和MALDI-FTICR MS方法尋找IBD特異的血清蛋白標志物,幫助疾病診斷,并通過對比激素治療前后IBD患者血清蛋白差異,尋找IBD激素治療敏感性和療效預測指標。第一部分IBD疾病特異血清蛋白標志物的蛋白質組學篩選方法：對65例健康對照、57例結直腸癌、69例UC和67例CD患者血清行Native-PAGE,基于IIRPCs對患者血清進行分類,使用Quantity One軟件對IIRPCs進行定量。使用SDS-PAGE對IIRPCs進一步分離,并用質譜鑒定IIRPCs包含的主要蛋白種類。結果：根據(jù)血清IIRPCs的條帶數(shù)目和位置,所有樣本可分為a、b、c和其他類型,以a、b型較為常見。其中a型包括a1、a2、a3、a4,4個IIRPCs,b型包括b1、b2、b3、b4、b5,5個IIRPCs,c型為空白型,不含IIRPCs。UC、CD和結直腸癌患者IIRPCs水平較健康人明顯升高(p0.05),且IBD患者IIRPCs水平高于結直腸癌患者(a2、a3、a4、b3、b4,p0.05),而UC與CD患者間IIRPCs水平無統(tǒng)計學差異(p0.05)�；顒悠赨C患者血清URPCs水平高于緩解期患者(中度活動期b2、b4、b5,p0.05；重度活動期a3、b2、b5,p0.05)�；顒悠贑D患者血清IIRPCs水平較緩解期升高,但無統(tǒng)計學差異(p0.05)。a3與ESR Pearson相關系數(shù)0.576,p值0.001;a3與hsCRP Pearson相關系數(shù)0.392,p=0.020；b4與ESR Pearson相關系數(shù)0.426,p=0.027；b4與hsCRP Pearson相關系數(shù)0.375,p=0.054。初步質譜鑒定結果表明,血清ⅡRPCs的主要組分為IgG1、IgA1、觸珠蛋白、補體C3、補體C4A、補體因子H等。結論：1. 可利用簡單的Native-PAGE方法,分離疾病相關的血清ⅡRPCs。并基于血清IRPCs的類型,IBD樣本可分為四類：類型a、b、c和其他類型,以a、b型較為常見。2. 血清ⅡRPCs的主要組分為IgG1、IgA1、觸珠蛋白、補體C3、補體C4A、補體因子H等。這些蛋白質是一些與免疫系統(tǒng)、炎癥系統(tǒng)和補體系統(tǒng)相關的蛋白質。3. UC、CD患者ⅡRPCs水平較健康人明顯升高,ⅡRPCs對于IBD的診斷具有極高的靈敏度�；顒悠赨C、CD患者ⅡRPCs水平較緩解期升高,提示ⅡRPCs水平可作為疾病活動度評估指標且與臨床常用炎癥指標如血沉、超敏C反應蛋白具有一定的正相關性。4. IBD患者ⅡRPCs水平高于結直腸癌患者。ⅡRPCs對于IBD和結直腸癌有一定的鑒別診斷能力,但無法鑒別UC和CD患者。第二部分IBD激素療效預測血清蛋白標志物的蛋白質組學篩選方法：對45組IBD患者激素治療前后的血清標本行Native-PAGE,對比激素治療前后血清蛋白差異,結合臨床資料分析激素療效預測指標。結果：與治療前相比,激素治療第1天、第7天、第14天血清IIRPCs濃度變化趨勢基本一致,且每種血清類型各條帶濃度變化趨勢基本一致。根據(jù)IIRPCs濃度變化趨勢分為上升趨勢組和下降趨勢組,統(tǒng)計學分析表明,上升趨勢組和下降趨勢組IIRPCs水平均存在統(tǒng)計學差異(p0.05)。結合臨床資料分析表明,上升趨勢組和下降趨勢組治療前HGB水平和治療前IIRPCs水平(a4、b5)存在統(tǒng)計學差異。對21例激素有效和7例激素無效UC患者進行分析,結果表明兩組間白蛋白水平和CMV感染率存在統(tǒng)計學差異。由于激素無效組僅2例收集到治療后時間點血標本,暫無法分析激素療效與IIRPCs水平變化趨勢間是否存在相關性。結論：IBD患者在激素治療后IIRPCs呈兩種變化趨勢：上升趨勢和下降趨勢。上升趨勢組和下降趨勢組治療前HGB水平和治療前IIRPCs水平(a4、b5)存在統(tǒng)計學差異。
【關鍵詞】：蛋白質組學 聚丙烯酰氨凝膠電泳 免疫炎癥相關蛋白復合物 診斷標志物 活動度 炎性腸病 激素抵抗 預測因素 白蛋白水平 CMV感染
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R574
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 第一部分 IBD疾病特異血清標志物的蛋白質組學篩選13-52
• 前言13-15
• 實驗材料15-18
• 實驗方法18-23
• 實驗結果23-48
• 討論48-51
• 第一部分結論51-52
• 第二部分 IBD激素療效預測血清標志物的蛋白質組學篩選初探52-62
• 前言52-53
• 實驗材料與方法53-54
• 實驗結果54-59
• 討論59-61
• 第二部分結論61-62
• 參考文獻62-65
• 綜述65-72
• 參考文獻69-72
• 致謝72-73

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本文編號：842712