本文關(guān)鍵詞：富納米硒沼澤紅假單胞菌對四氯化碳導(dǎo)致肝損傷小鼠的保護作用研究

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【摘要】：本文采用單因子實驗和四因素三水平正交實驗,確定了沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris)還原亞硒酸鈉為紅色單質(zhì)硒的最優(yōu)條件。在優(yōu)化實驗中,先確定了沼澤紅假單胞菌還原亞硒酸鈉四個因素(亞硒酸鈉濃度、菌種接種量、培養(yǎng)基初始pH值、培養(yǎng)時間)的最佳水平,再選取四因素三水平：亞硒酸鈉濃度(lmmol/L、2mmol/L、3mmol/L)、菌種接種量(5%、10%、15%)、培養(yǎng)基初始pH值(5、6、7)、培養(yǎng)時間(6d、7d、8d)進行正交實驗,確定了轉(zhuǎn)化的最佳水平。在此基礎(chǔ)上,為進一步研究本實驗室轉(zhuǎn)化得到的紅色單質(zhì)硒的生物活性,將雄性昆明小鼠隨機分為9個組,即空白對照組、富納米硒沼澤紅假單胞菌高劑量對照組(200μg/kg.BW)、三個濃度的富納米硒沼澤紅假單胞菌處理組(50、100、200μg/kg.BW+CCl4)以及三個相應(yīng)劑量沼澤紅假單胞菌處理組,研究富納米硒沼澤紅假單胞菌對小鼠CCl4致急性肝損傷的肝保護效應(yīng)。小鼠按相應(yīng)劑量的溶液連續(xù)灌胃14d之后,除空白對照組和富納米硒沼澤紅假單胞菌高劑量對照組腹腔注射植物油之外,其余組均一次性腹腔注射1%的CCl4(10mL/Kg.BW),建立急性肝損傷模型。造模24h后取血清,測各項血清酶指標：谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(AKP)、乳酸脫氫酶(LDH)；取肝臟和脾臟分別計算肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)；取肝組織檢測肝臟抗氧化酶(SOD、CAT、GPx)活力以及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物(MDA)水平；采用常規(guī)石蠟切片法研究了富納米硒沼澤紅假單胞菌對小鼠肝組織病理結(jié)構(gòu)與功能的影響。旨在驗證富納米硒沼澤紅假單胞菌對小鼠肝臟的保護作用。結(jié)果顯示：1.通過沼澤紅假單胞菌將亞硒酸鈉還原為紅色單質(zhì)硒條件的優(yōu)化：對轉(zhuǎn)化率影響較大的因素由高到低依次為：亞硒酸鈉濃度培養(yǎng)時間培養(yǎng)基初始pH值菌種接種量；N菌株還原亞硒酸鹽得到紅色單質(zhì)硒的最適條件為：亞硒酸鈉添加量2.0mmol/L、培養(yǎng)時間8d、培養(yǎng)基初始pH7.0和接種量15%,優(yōu)化后轉(zhuǎn)化率達到91.36%。2.小鼠體內(nèi)生理生化實驗結(jié)果：富納米硒沼澤紅假單胞菌最高劑量對照組與空白對照組基本保持在同一水平,四氯化碳模型組均與空白對照組差異極顯著。富納米硒沼澤紅假單胞菌能夠明顯降低由CCl4誘導(dǎo)的肝損傷引起的小鼠血清中ALT、AST、 AKP、LDH升高；降低肝損傷導(dǎo)致的肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)增加；提高肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)活力,降低肝組織內(nèi)丙二醛(MDA)含量,且硒劑量越高,保護效果越明顯。3.小鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果顯示：富納米硒沼澤紅假單胞菌能夠減輕四氯化碳損傷導(dǎo)致的肝臟表面出血點癥狀；能夠明顯改善肝損傷小鼠的肝細胞壞死、炎性浸潤、氣球樣變、細胞水腫、核固縮現(xiàn)象,保護效果呈明顯劑量效應(yīng),最高劑量保護組僅有散在點狀壞死,輕微細胞水腫。由以上研究結(jié)果得出如下結(jié)論：①富納米硒沼澤紅假單胞菌在一定程度上可以減少肝損傷所致血清酶的釋放,提高抗氧化酶活力。②能夠改善四氯化碳所致肝損傷引起的肝細胞壞死、發(fā)炎等癥狀。③本實驗使用的最大劑量富納米硒沼澤紅假單胞菌對小鼠肝臟無毒,且對四氯化碳所致肝損傷小鼠具有保肝作用,其保護機制可能為富納米硒沼澤紅假單胞菌能夠清除自由基,抑制脂質(zhì)過氧化,提高機體抗氧化水平,保護細胞膜、線粒體膜等生物膜的完整性,從而保障細胞正常生理功能。
【關(guān)鍵詞】：富納米硒沼澤紅假單胞菌 肝損傷 保護 抗氧化 組織細胞結(jié)構(gòu)觀察
【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575
【目錄】：

• 中文摘要10-12
• 英文摘要12-14
• 第一章 綜述14-22
• 1 硒的生物學(xué)活性14-16
• 1.1 抗氧化14-15
• 1.2 增強免疫能力15
• 1.3 硒的抗腫瘤功能15-16
• 1.4 硒的其它功能16
• 2 硒的存在形式16-18
• 2.1 硒的三種存在形式16-17
• 2.2 三種硒的特點17
• 2.3 單質(zhì)硒的微生物制備方法17-18
• 2.3.1 微生物轉(zhuǎn)硒機制17-18
• 2.3.2 沼澤紅假單胞菌制備單質(zhì)硒18
• 3 硒與肝保護18-19
• 4 研究目的及意義19-22
• 第二章 光合細菌還原亞硒酸鹽為單質(zhì)硒條件的優(yōu)化22-32
• 摘要22-23
• 1 材料與方法23-25
• 1.1 菌種及培養(yǎng)基23-24
• 1.1.1 菌種23
• 1.1.2 培養(yǎng)基23-24
• 1.2 光合細菌還原亞硒酸鹽轉(zhuǎn)化率的優(yōu)化24-25
• 1.2.1 光合細菌培養(yǎng)24
• 1.2.2 亞硒酸鈉添加量對光合細菌還原亞硒酸鹽轉(zhuǎn)化率的影響24
• 1.2.3 培養(yǎng)基初始pH值對光合細菌還原亞硒酸鹽轉(zhuǎn)化率的影響24
• 1.2.4 培養(yǎng)時間對光合細菌還原亞硒酸鹽轉(zhuǎn)化率的影響24
• 1.2.5 接種量對光合細菌還原亞硒酸鹽轉(zhuǎn)化率的影響24
• 1.2.6 光合細菌還原亞硒酸鹽的正交試驗24-25
• 1.2.7 含硒量測定25
• 1.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計25
• 2 結(jié)果與討論25-29
• 2.1 亞硒酸鈉添加量對光合細菌還原亞硒酸鹽轉(zhuǎn)化率的影響25
• 2.2 培養(yǎng)時間對光合細菌還原亞硒酸鹽轉(zhuǎn)化率的影響25-26
• 2.3 培養(yǎng)基初始pH值對光合細菌還原亞硒酸鹽轉(zhuǎn)化率的影響26
• 2.4 接種量對光合細菌還原亞硒酸鹽轉(zhuǎn)化率的影響26-27
• 2.5 光合細菌還原亞硒酸鹽的正交試驗27-29
• 3 小結(jié)29-30
• Abstract30-32
• 第三章 富納米硒沼澤紅假單胞菌對肝損傷小鼠的保護作用32-48
• 摘要32-33
• 1 材料與方法33-35
• 1.1 實驗材料33
• 1.2 主要試劑33
• 1.3 實驗方法33-34
• 1.3.1 富納米硒沼澤紅假單胞菌的制備33
• 1.3.2 實驗動物的飼養(yǎng)及肝損傷模型的建立33-34
• 1.3.3 取材34
• 1.4 檢測方法34-35
• 1.4.1 體視顯微鏡觀察肝組織形態(tài)34
• 1.4.2 組織切片觀察34-35
• 1.4.3 血清酶的測定35
• 1.4.4 數(shù)據(jù)分析35
• 2 實驗結(jié)果35-44
• 2.1 小鼠基本情況觀察35-36
• 2.2 富納米硒沼澤紅假單胞菌對肝損傷小鼠肝臟和脾臟指數(shù)的影響36-37
• 2.3 富納米硒沼澤紅假單胞菌對肝損傷小鼠血清酶的影響37-38
• 2.4 富納米硒沼澤紅假單胞菌對肝損傷小鼠肝臟形態(tài)的影響38-40
• 2.5 富納米硒沼澤紅假單胞菌對肝損傷小鼠肝組織顯微結(jié)構(gòu)的影響40-44
• 3 討論44-46
• 3.1 富納米硒沼澤紅假單胞菌對肝損傷小鼠肝臟和脾臟指數(shù)的影響45
• 3.2 富納米硒沼澤紅假單胞菌對肝損傷小鼠血清酶含量的影響45-46
• 3.3 富納米硒沼澤紅假單胞菌對肝損傷小鼠組織病理學(xué)的影響46
• 4 小結(jié)46-47
• Abstract47-48
• 第四章 富納米硒沼澤紅假單胞菌對肝損傷小鼠抗氧化水平和脂質(zhì)過氧化水平的影響48-55
• 摘要48
• 1 材料與方法48-49
• 1.1 實驗材料48-49
• 1.2 主要試劑49
• 1.3 實驗方法49
• 1.3.1 富納米硒沼澤紅假單胞菌的制備49
• 1.3.2 實驗動物的飼養(yǎng)及肝損傷模型的建立49
• 1.3.3 取材49
• 1.3.4 檢測方法49
• 1.3.5 數(shù)據(jù)分析49
• 2 結(jié)果49-51
• 2.1 富納米硒沼澤紅假單胞菌對肝損傷小鼠肝組織抗氧化酶活力的影響49-50
• 2.2 富納米硒沼澤紅假單胞菌對肝損傷小鼠肝組織脂質(zhì)過氧化水平的影響50-51
• 3 討論51-53
• 3.1 富納米硒沼澤紅假單胞菌對肝損傷小鼠抗氧化酶的影響51-53
• 3.2 富納米硒沼澤紅假單胞菌對肝損傷小鼠脂質(zhì)過氧化水平的影響53
• 4 小結(jié)53-54
• Abstract54-55
• 參考文獻55-64
• 在讀期間發(fā)表論文64-65
• 致謝65-66
• 個人簡況及聯(lián)系方式66-67
• 承諾書67-68

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 寧嬋娟;吳國良;;微量元素硒與人體健康及我國富硒食品的開發(fā)狀況[J];山西農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年05期

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本文編號：808033