本文關(guān)鍵詞：IL-1R1對(duì)小鼠肝損傷的作用機(jī)理研究

  更多相關(guān)文章： IL-1R1 KO CCl_4 老年小鼠 肝再生 急性肝衰竭

【摘要】：肝臟以其眾多的生理功能和獨(dú)特的再生潛力成為人和動(dòng)物體內(nèi)最重要的代謝器官。研究表明,肝臟在隨年齡衰老過(guò)程中,其功能似乎保持不變,這種功能的保持依賴于肝臟獨(dú)特的再生潛力。近年來(lái),急性肝衰竭患者顯著增加,卻沒(méi)有特別有效的治療方法和藥物,尤其對(duì)于老年患者來(lái)說(shuō),急性肝衰竭死亡風(fēng)險(xiǎn)很高。IL-1是體內(nèi)廣泛存在的炎癥因子,IL-1信號(hào)對(duì)于生物體的損傷和感染應(yīng)答至關(guān)重要。而IL-1信號(hào)通路在衰老肝臟功能維持和急性肝損傷修復(fù)過(guò)程中的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。IL-1R1承擔(dān)介導(dǎo)IL-1幾乎所有的生理功能,其在小鼠尤其是老齡小鼠肝臟損傷后的肝再生中發(fā)揮作用的機(jī)制還沒(méi)有進(jìn)行研究。近年來(lái),基因敲除技術(shù)被廣泛的應(yīng)用到功能基因組學(xué)研究。因此,我們引進(jìn)了IL-11R1 KO小鼠,建立了IL-11R1 KO老年小鼠2/3肝切除模型和CCl_4誘導(dǎo)的急性肝衰竭模型,從分子水平來(lái)研究IL-1R1在衰老肝臟損傷后恢復(fù)過(guò)程中發(fā)揮作用的機(jī)理。野生型老年小鼠2/3部分肝切除后6h,IL-1R1 mRNA就達(dá)到表達(dá)高峰,我們猜測(cè)IL-1可能通過(guò)IL-1R1介導(dǎo)其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來(lái)促進(jìn)肝再生的啟動(dòng)和肝細(xì)胞的增殖。為了深入研究IL-1R1發(fā)揮作用的機(jī)理,我們對(duì)早期炎癥因子基因Tnf-a、Emr1、Mcp-1、IL-6、C cr2和Ifn-γ,即刻早期因子基因Fos和c-Jun,細(xì)胞周期調(diào)控基因Cyclin D1、Cyclin A2、Cyclin B1和增殖標(biāo)志蛋白PCNA以及增殖相關(guān)信號(hào)通路信號(hào)分子JNK1、NF-κB和ST AT3,凋亡通路相關(guān)蛋白Caspase-8、Caspase-3、Bax和Bcl-2進(jìn)行了檢測(cè),結(jié)果顯示在IL-1R1 KO老年小鼠中,Fos和c-Jun的表達(dá)在肝再生中后期有明顯下調(diào)和延遲;Cyclin D1表達(dá)量比WT小鼠降低和延遲,PCNA的表達(dá)延遲;IL-1R1 KO老年小鼠的JNK1磷酸化表達(dá)的比例相較于WT老年小鼠有顯著降低,STAT3磷酸化表達(dá)的比例在中后期降低和延遲;Bax表達(dá)在PH后6h有顯著上調(diào),Caspase-3表達(dá)在PH后120h顯著上調(diào)�？偟目磥�(lái),IL-1R1 KO老年小鼠肝損傷后再生能力降低,主要通過(guò)抑制JNK1、ST AT3等增殖信號(hào)通路的活化來(lái)抑制或延遲肝細(xì)胞的增殖和增強(qiáng)Caspase-3和Bax的表達(dá)來(lái)促進(jìn)肝細(xì)胞凋亡。CCl_4誘導(dǎo)老年小鼠急性肝衰竭后,IL-1R1 mRNA的表達(dá)與Control相比在全過(guò)程都極顯著上調(diào),說(shuō)明IL-1R1在急性肝衰竭中可能發(fā)揮了重要作用。血清ALT、AST檢測(cè)以及組織切片H.E染色結(jié)果表明IL-1R1 KO小鼠與WT小鼠有部分差異,隨后對(duì)炎癥因子基因Tnf-a、Emr1、Mcp-1、IL-6、Ccr2、Ifn-γ,肝功能標(biāo)志蛋白SOD2、PAFAH1B2、GGT1,凋亡蛋白Caspase-8、Caspase-3、Bax和Bcl-2,以及谷胱甘肽GSH進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示IL-1R1 KO老年小鼠的TNF-α和Mcp-1的表達(dá)大部分時(shí)間低于WT老年小鼠,Ifn-γ、Ccr2和Emr1的表達(dá)僅在少數(shù)時(shí)間點(diǎn)低于WT老年小鼠;SOD2、PAFAH1B2表達(dá)略低于WT小鼠;Caspase-8和Bax在個(gè)別時(shí)間點(diǎn)顯著上調(diào);GSH含量在建模后28h顯著低于WT對(duì)照。上述結(jié)果表明,IL-1R1 KO一定程度上阻礙了促炎癥因子IL-1正常發(fā)揮功能,影響炎癥反應(yīng)的發(fā)生時(shí)間和反應(yīng)程度,但是與WT小鼠相比,對(duì)急性肝衰竭中老年小鼠的肝損傷是類似的,總體上變化不大。
【關(guān)鍵詞】：IL-1R1 KO CCl_4 老年小鼠 肝再生 急性肝衰竭
【學(xué)位授予單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-13
• 縮略語(yǔ)表13-14
• 第一章 綜述14-26
• 1.1 肝再生的研究進(jìn)展14-17
• 1.1.1 肝臟的結(jié)構(gòu)和功能14
• 1.1.2 肝再生與肝再生模型14-15
• 1.1.3 肝再生的進(jìn)程及其調(diào)控15-17
• 1.2 白細(xì)胞介素-1 的研究進(jìn)展17-19
• 1.2.1 白細(xì)胞介素-1 的結(jié)構(gòu)17-18
• 1.2.2 白細(xì)胞介素-1 的生物學(xué)效應(yīng)18-19
• 1.3 白細(xì)胞介素-1 受體（IL-1R）的研究進(jìn)展19-20
• 1.3.1 白細(xì)胞介素-1 受體（IL-1R）的結(jié)構(gòu)19
• 1.3.2 白細(xì)胞介素-1 受體（IL-1R）的功能19-20
• 1.4 急性肝衰竭研究進(jìn)展20-22
• 1.4.1 急性肝衰竭的概念20-21
• 1.4.2 急性肝衰竭研究模型制備21
• 1.4.3 CCl_4誘導(dǎo)的急性肝衰竭21-22
• 1.5 基因敲除技術(shù)的研究現(xiàn)狀與應(yīng)用22-23
• 1.5.1 基因敲除方法22-23
• 1.5.2 基因敲除技術(shù)的應(yīng)用23
• 1.6 本論文的研究目的和意義23-26
• 1.6.1 研究目的和意義23
• 1.6.2 研究?jī)?nèi)容23-24
• 1.6.3 技術(shù)路線24-26
• 第二章 IL-1R1 KO對(duì)老年小鼠部分肝切除后肝再生的作用研究26-47
• 2.1 材料與方法28-36
• 2.1.1 主要耗材與儀器28-29
• 2.1.2 主要試劑與配制29-31
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物31
• 2.1.4 IL-1R1敲除小鼠基因型鑒定31-33
• 2.1.5 制備小鼠 2/3 部分肝切除模型33
• 2.1.6 死亡率和肝系數(shù)33
• 2.1.7 樣品的采集33-34
• 2.1.8 小鼠總RNA提取34
• 2.1.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)34-35
• 2.1.10 蛋白質(zhì)免疫印跡Western Blotting35-36
• 2.1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析36
• 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-44
• 2.2.1 IL-1R1在WT小鼠肝再生中的表達(dá)變化36-37
• 2.2.2 IL1-R1 KO小鼠基因型鑒定37-38
• 2.2.3 WT小鼠和IL1-R1敲除小鼠的死亡率和肝系數(shù)38
• 2.2.4 即刻早期基因Fos和c-Jun在WT小鼠和IL-1R1 KO小鼠肝再生中的表達(dá)變化38-39
• 2.2.5 細(xì)胞周期相關(guān)基因和增殖相關(guān)基因在WT小鼠和IL-1R1 KO小鼠肝再生中的表達(dá)變化39-41
• 2.2.6 炎癥因子在WT小鼠和IL-1R1 KO小鼠肝再生中的表達(dá)變化41-42
• 2.2.7 增殖和凋亡通路相關(guān)蛋白在WT小鼠和IL-1R1 KO小鼠肝再生中的表達(dá)變化42-44
• 2.3 討論44-47
• 第三章 IL-1R1 KO對(duì)CCl_4誘導(dǎo)的老年小鼠急性肝衰竭作用研究47-58
• 3.1 材料與方法48-51
• 3.1.1 主要耗材與儀器48
• 3.1.2 主要試劑與配制48
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物48
• 3.1.4 IL-1R1基因敲除小鼠的鑒定48
• 3.1.5 制備小鼠CCl_4誘導(dǎo)的急性肝衰竭模型48-49
• 3.1.6 樣品的采集49
• 3.1.7 組織切片的H.E.染色49
• 3.1.8 總RNA的提取49-50
• 3.1.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)50
• 3.1.10 蛋白質(zhì)免疫印跡50
• 3.1.11 谷胱甘肽檢測(cè)50
• 3.1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析50-51
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果51-55
• 3.2.1 IL-1R1在CCl_4誘導(dǎo)的老年小鼠急性肝衰竭中的表達(dá)變化51
• 3.2.2 血清中轉(zhuǎn)氨酶（ALT、AST）在CCl_4誘導(dǎo)的老年小鼠急性肝衰竭中的含量變化51-52
• 3.2.3 CCl_4誘導(dǎo)的老年小鼠急性肝衰竭中肝組織切片的結(jié)構(gòu)變化52
• 3.2.4 炎癥因子基因Tnf-α、IL-6、Ifn-γ、Mcp-1、Ccr2、Emr1的表達(dá)變化52-53
• 3.2.5 肝功能標(biāo)志蛋白在CCl_4誘導(dǎo)的老年小鼠急性肝衰竭中的表達(dá)變化53-54
• 3.2.6 凋亡相關(guān)蛋白在CCl_4誘導(dǎo)的老年小鼠急性肝衰竭中的表達(dá)變化54-55
• 3.2.7 谷胱甘肽（GSH）在CCl_4誘導(dǎo)的老年小鼠急性肝衰竭中的含量變化55
• 3.3 討論55-58
• 結(jié)論58-60
• 參考文獻(xiàn)60-68
• 致謝68-70
• 攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目及已發(fā)表的論文70-71

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