本文關鍵詞：JAZF1在非酒精性脂肪肝形成與發(fā)展中的作用機制研究

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【摘要】：第一部分JAZF1抵抗老齡化誘導的NAFLD的形成目的:探討JAZF1基因過表達在老齡化誘導的NAFLD形成中的作用。方法:15只8周齡的JAZF1轉基因小鼠(JAZF1-Tg鼠)和15只同年齡匹配的C57BL/6J小鼠(WT鼠)普食喂養(yǎng)3個時間段(3個月,6個月,12個月),每個時間點隨機抽取JAZF1-Tg和WT鼠各5只,檢測隨著年齡的增長各組小鼠的基礎生理代謝指標以及肝臟中涉及脂肪酸從頭合成和氧化相關基因的m RNA及蛋白水平。結果:隨著年齡的增長,WT鼠肝細胞內甘油三酯累積明顯增多(P0.05);與同齡的WT鼠比較,JAZF1-Tg鼠肝細胞內甘油三酯含量明顯減少(P0.05);與同齡的WT鼠比較,喂養(yǎng)12個月后的JAZF1-Tg鼠血TG、TC含量明顯減少(P0.05);基因m RNA水平檢測顯示,與同齡WT鼠比較,喂養(yǎng)6個月和12個月后的JAZF1-Tg鼠肝臟中脂肪酸從頭合成相關基因(SREBP-1c,SCD-1,FAS,ACC-1)表達明顯下調(P0.05),而與脂肪酸氧化相關的基因((PPAR-α,CPT-1)表達變化不明顯(p0.05);隨著年齡的增長,JAZF1基因的m RNA和蛋白水平表達明顯下調(P0.05),而SREBP-1c基因的m RNA和蛋白水平表達明顯上調(P0.05)。結論:隨著年齡的增長,肝臟中JAZF1基因表達下調,JAZF1過表達可抵抗老齡化誘導的NAFLD的形成。第二部分JAZF1改善高脂喂養(yǎng)誘導的NAFLD的形成與發(fā)展目的:探討JAZF1在高脂喂養(yǎng)誘導的NAFLD的形成與發(fā)展中的作用及相關分子機制。方法:30只8周齡的JAZF1-Tg鼠和30只WT鼠分別隨機分為2組:普食喂養(yǎng)組(n=15)和高脂喂養(yǎng)組(n=15),各組小鼠喂養(yǎng)3個時間段(3個月,6個月,12個月),每個時間點隨機抽取高脂和普食喂養(yǎng)的JAZF1-Tg和WT鼠各5只。檢測各時間段小鼠的基礎生理代謝指標以及肝臟中涉及脂肪酸從頭合成與氧化相關基因的m RNA及蛋白水平。分析每個喂養(yǎng)階段小鼠肝臟中AMPK/ACC信號變化情況。結果:HE染色結果顯示,隨著喂養(yǎng)時間的延長,高脂喂養(yǎng)的WT鼠肝臟中脂肪變性程度逐漸加重,由最初少量肉眼可見的脂滴沉積,到彌漫性的脂肪變性,甚至高脂12個月的時候出現(xiàn)了大泡性脂肪變性以及炎癥細胞的浸潤。但是,與同階段高脂喂養(yǎng)WT鼠比較,JAZF1-Tg鼠的基礎代謝指標和肝臟中的TG,TC含量,以及組織學HE染色和油紅O染色結果均明顯改善。基因檢測顯示,與同階段喂養(yǎng)的高脂WT鼠比較,JAZF1-Tg鼠肝臟中脂肪從頭合成相關基因的m RNA(SREBP-1c,SCD-1,FAS,ACC-1)明顯下調,相關蛋白SREBP-1和FAS表達也呈現(xiàn)明顯下調(P0.05),而與脂肪酸氧化相關基因的m RNA(PPAR-α,CPT-1)表達變化不明顯(p0.05);且在高脂喂養(yǎng)3個月和6個月時,與WT鼠比較,JAZF1-Tg鼠肝臟AMPK信號檢測顯示,AMPK及其下游靶蛋白ACC的磷酸化均明顯增加(P0.05)。結論:JAZF1過表達主要通過減少脂肪的從頭合成,改善高脂喂養(yǎng)誘導的NAFLD的形成與發(fā)展。第三部分JAZF1減少脂肪酸誘導的肝細胞內脂質累積及相關機制研究目的:探討JAZF1在脂肪酸誘導的肝細胞脂肪變性中的作用及相關分子機制。方法:在小鼠的原代肝細胞(PMH細胞)以及人Hep G2肝癌細胞中,利用1m M的FFAs(OA:PA=2:1的比例)誘導肝脂肪變性細胞模型,同時,利用JAZF1過表達病毒(Ad-JAZF1)和JAZF1的抑制病毒(sh JAZF1)分別過表達和抑制JAZF1的表達,探討JAZF1基因在FFAs誘導的肝細胞脂質累積中的作用,檢測脂肪酸從頭合成相關基因(SREBP-1c,SCD-1,FAS,ACC-1)的m RNA及相關蛋白的表達,分析肝細胞中AMPK/ACC信號變化情況。同時,構建SREBP-1c基因啟動子,雙熒光素酶報告基因分析JAZF1基因對SREBP-1c基因啟動子的調控作用。結果:在小鼠的PMH和人Hep G2肝癌細胞中,均成功誘導了肝脂肪變性細胞模型。在兩種肝脂肪變性細胞中,JAZF1過表達減少FFAs誘導的PMH和Hep G2細胞內脂滴的累積,與Ad-GFP組比較,Ad-JAZF1組在FFAs誘導的脂肪變性肝細胞中脂肪酸從頭合成基因的m RNA(SREBP-1c,SCD-1,FAS,ACC-1)和相關蛋白(SREBP-1,FAS)表達明顯下調(P0.05);JAZF1抑制增多FFAs誘導的PMH和Hep G2細胞內脂滴的累積,與HK組比較,sh JAZF1組在FFAs誘導的兩種脂肪變性肝細胞中脂肪酸從頭合成相關基因的m RNA(SREBP-1c,SCD-1,FAS,ACC-1)和相關蛋白(SREBP-1,FAS)表達明顯上調(P0.05);與Ad-GFP組比較,Ad-JAZF1組在FFAs誘導的兩種脂肪變性肝細胞中AMPK及其下游靶蛋白ACC的磷酸化均明顯增加;與HK組比較,sh JAZF1組在FFAs誘導的Hep G2脂肪變性肝細胞中AMPK及其下游靶蛋白ACC的磷酸化均明顯下降,在PMH脂肪變性肝細胞中,AMPK的磷酸化雖下降趨勢不明顯,但是ACC的磷酸化下降有明顯差異(P0.05);雙熒光素酶報告基因分析JAZF1基因在基礎狀態(tài)下對SREBP-1c基因啟動子無明顯調控作用(p0.05),但是在胰島素刺激下,JAZF1基因可顯著下調胰島素誘導的SREBP-1c基因啟動子的活性(p0.05)。結論:JAZF1激活AMPK信號,減少肝細胞內脂肪的從頭合成,改善脂肪酸誘導的肝細胞內甘油三酯的累積。同時,在胰島素的刺激下,JAZF1過表達可抑制胰島素誘導的SREBP-1c啟動子活性。
【關鍵詞】：NAFLD JAZF1 SREBP-1c 老齡化 NAFLD JAZF1 SREBP-1 AMPK NAFLD JAZF1 SREBP-1 AMPK
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575.5
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-7
• 中文摘要7-13
• 英文摘要13-20
• 引言20-23
• 第一部分 JAZF1抵抗老齡化誘導的NAFLD的形成23-43
• 1 實驗材料23-26
• 2 實驗方法26-34
• 3 結果34-40
• 4 討論40-43
• 第二部分 JAZF1改善高脂喂養(yǎng)誘導的NAFLD的形成與發(fā)展43-59
• 1 實驗材料43-44
• 2 實驗方法44
• 3 結果44-57
• 4 討論57-59
• 第三部分 JAZF1減少脂肪酸誘導的肝細胞內脂質累積及相關機制研究59-84
• 1 實驗材料59-62
• 2 實驗方法62-68
• 3 結果68-81
• 4 討論81-84
• 全文總結84-86
• 課題的創(chuàng)新點與局限性86-87
• 參考文獻87-95
• 文獻綜述95-109
• 參考文獻101-109
• 致謝109-110
• 攻讀學位期間的研究成果及發(fā)表的學術論文目錄110

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

1 Monjur Ahmed;;Non-alcoholic fatty liver disease in 2015[J];World Journal of Hepatology;2015年11期

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本文編號：709067