本文關(guān)鍵詞：大麻素CB2受體激動劑AM1241對大鼠肝星狀細胞系HSC-T6的影響及其機制

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【摘要】：目的:探討大麻素CB2受體激動劑AM1241對大鼠肝星狀細胞系HSC-T6的影響及其機制。方法:1、噻唑藍法分別檢測(0、20、50、80umol/L)AM1241和(0、10、20、30、40umol/L)AM630干預24h下HSC-T6的存活率,根據(jù)實驗所測得的細胞存活率選擇最佳的用藥濃度。2、將HSC-T6分成對照組、氧化應(yīng)激組、AM1241(20、80 umol/L)干預組共四組。對照組用低糖(Dulbecco’s modification of Eagle’s medium Dulbecco,DMEM)完全培養(yǎng)液正常培養(yǎng)2h,氧化應(yīng)激組用含葡萄糖氧化酶(100m U/L)低糖DMEM完全培養(yǎng)液培養(yǎng)2 h,AM1241干預組分別加入20、80umol/L的AM1241干預3 h后,再加入葡萄糖氧化酶(100 mU/L)干預2 h。細胞免疫化學染色法觀察各組HSC-T6胞漿中α-平滑肌肌動蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)的表達情況;收集各組HSC-T6的培養(yǎng)液上清,離心之后,ELISA檢測上清液中的Ι型膠原(type colcollagenΙ,ColⅠ)的含量;檢測HSC-T6裂解液中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量;Western blot檢測HSC-T6中核轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)總蛋白與核蛋白含量。3、將HSC-T6分成對照組、氧化應(yīng)激組、AM1241干預組、AM1241+AM630拮抗組共四組。對照組用低糖DMEM完全培養(yǎng)液正常培養(yǎng)12h,氧化應(yīng)激組用含100mU/L的葡萄糖氧化酶的低糖DMEM完全培養(yǎng)液培養(yǎng)12h;AM1241干預組用含50umol/L AM1241的低糖DMEM完全培養(yǎng)液培養(yǎng)12h,AM1241+AM630拮抗組用大麻素CB2受體拮抗劑20umol/L AM630干預2h后,再用含50umol/L AM1241的低糖DMEM完全培養(yǎng)液培養(yǎng)12h;ELISA法檢測各組HSC-T6培養(yǎng)液上清ColⅠ和Ⅲ型膠原(type ColcollagenⅢ,ColⅢ)的含量;檢測各組HSC-T6裂解液中谷胱甘肽(glutathione,GSH)的含量;Western blot法分別檢測HSC-T6中大麻素型Ⅱ受體(Cannabinoid Receptor 2,CB2)、Nrf2、血紅素加氧酶1(hemeoxygenase-1,HO-1)的蛋白表達量。結(jié)果:1、(20、50、80umol/L)AM1241干預組HSC-T6的存活率依次降低,與0umol/L AM1241干預組相比較,有統(tǒng)計學意義(p0.05),AM630各濃度組對HSC-T6的存活率無明顯作用(p0.05)。2、對照組HSC-T6胞質(zhì)中無明顯α-SMA表達,氧化應(yīng)激組α-SMA明顯表達,與氧化應(yīng)激組比較,AM1241(20、80umol/L)干預組HSC-T6胞質(zhì)α-SMA表達有所下降(p0.05);與對照組比較,氧化應(yīng)激組HSC-T6細胞培養(yǎng)上清中Col I含量升高(p0.05),與氧化應(yīng)激組比較,AM1241(20、80 umol/L)干預組HSC-T6細胞培養(yǎng)上清中Col I含量明顯下降(p0.05)。氧化應(yīng)激組HSC-T6較對照組HSC-T6中MDA含量上升,SOD活性明顯下降(p0.05),與氧化應(yīng)激組比較,AM1241(20、80 umol/L)干預組HSC-T6細胞MDA含量下降,SOD活性明顯上升(p0.05);對照組、氧化應(yīng)激組、AM1241(20、80umol/L)干預組HSC-T6細胞中Nrf2總蛋白表達量無明顯差異(p0.05);AM1241(20、80 umol/L)干預組Nrf2核蛋白表達量比氧化應(yīng)激組明顯增多(p0.05)。3、與對照組相比,氧化應(yīng)激組HSC-T6的細胞外基質(zhì)ColⅠ、ColⅢ的表達量明顯升高(p0.05),AM1241干預組HSC-T6的細胞外基質(zhì)ColⅠ、ColⅢ的表達較氧化應(yīng)激組明顯減低(p0.05),而AM1241+AM630干預組HSC-T6 ColⅠ、ColⅢ的含量比AM1241干預組明顯增高(p0.05),與氧化應(yīng)激組相比無明顯差異;與對照組相比,氧化應(yīng)激組HSC-T6中的GSH含量有所升高(p0.05),AM1241干預組HSC-T6中的GSH含量較氧化應(yīng)激組相比有所升高,而AM1241+AM630拮抗組HSC-T6中GSH的含量較AM1241干預組明顯下降(p0.05),與氧化應(yīng)激組無明顯差異;對照組、氧化應(yīng)激組、AM1241干預組、AM630+AM1241拮抗組HSC-T6中CB2的蛋白有所表達,與比對照組相比,AM1241干預組CB2的表達有所增高(p0.05);氧化應(yīng)激組、AM1241干預組HSC-T6中Nrf2、HO-1的蛋白表達比對照組均明顯增高,AM1241干預組增高更為明顯,而AM630+AM1241拮抗組的Nrf2、HO-1的蛋白表達明顯低于AM1241干預組(p0.05),與氧化應(yīng)激組無明顯差異。結(jié)論:大麻素CB2受體激動劑AM1241可抑制HSC-T6的增殖與活化,其機制可能與AM1241經(jīng)大麻素CB2受體通道,激活HSC-T6細胞內(nèi)Nrf2,使Nrf2發(fā)生核內(nèi)轉(zhuǎn)移,導致Nrf2和HO-1的蛋白表達量上調(diào),增加HSC-T6的抗氧化作用有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：大麻素CB2受體 肝纖維化 氧化應(yīng)激 HSC-T6 Nrf2 HO-1
【學位授予單位】：貴州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-10
• 略縮詞表10-11
• 引言11-12
• 材料與方法12-24
• 結(jié)果24-32
• 討論32-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-40
• 綜述40-50
• 參考文獻46-50
• 作者簡歷50-51
• 致謝51-52
• 學位論文數(shù)據(jù)集52

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本文編號：654046