本文關(guān)鍵詞：AHR對(duì)腸上皮源IL-7的調(diào)節(jié)在炎性腸病炎癥緩解中的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：背景與目的炎性腸病(Inflammatory bowel disease,IBD)的主要癥狀表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作很難治愈的腹瀉、腹痛、粘液血便。炎性腸病曾被認(rèn)為是發(fā)達(dá)國(guó)家專屬的常見疾病,但是隨著中國(guó)經(jīng)濟(jì)文化水平的穩(wěn)步增長(zhǎng),國(guó)內(nèi)炎性腸病的病例數(shù)日益增多,已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)消化系統(tǒng)常見的疾病。病理上IBD表現(xiàn)為整個(gè)腸道免疫系統(tǒng)的失調(diào)并伴隨著慢性頑固但是無菌性的炎癥,但是它的精確發(fā)病機(jī)制還不清楚。為了更好的研究IBD,目前已經(jīng)建立了很多動(dòng)物腸炎模型。其中葡聚糖硫酸鈉(Dextran sulfate sodium,DSS)誘導(dǎo)的腸炎模型是近二十年來最常用的模型,因?yàn)樗菀讟?gòu)建并且和炎性腸病有很相似的臨床表現(xiàn)。異硫氰酸熒光素(Fluorescein isothio cyanate,Ficz)是芳香烴受體(Aryl hydrocarbon receptor,AHR)的一種配體。AHR作為螺旋-環(huán)-螺旋家族中新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)亞家族成員,是一種依賴于配體激活的轉(zhuǎn)錄因子,以配體以來的方式進(jìn)入細(xì)胞核,與AHR核轉(zhuǎn)位子形成異源二聚體,特異性結(jié)合于AHR反應(yīng)原件,誘導(dǎo)包括外源性代謝酶在內(nèi)的一系列下游目的基因的表達(dá)。越來越多的研究表明AHR可以抑制腸道炎癥。此外,很多研究也表明AHR在維持腸上皮間淋巴細(xì)胞(Intra epithelial lymphocyte,IEL)生存中起著關(guān)鍵作用。腸上皮源性白介素7(Interleukin-7,IL-7)在T細(xì)胞和B細(xì)胞發(fā)育中起著重要作用。在IL-7敲除的小鼠中胸腺細(xì)胞和骨髓B細(xì)胞數(shù)量明顯減少。最近,研究發(fā)現(xiàn)腸上皮來源的IL-7激活了腸道免疫系統(tǒng)從而導(dǎo)致腸道的慢性炎癥。先前的研究也發(fā)現(xiàn)腸源性IL-7在IEL表型變化中起著重要作用。IEL是調(diào)節(jié)腸道免疫的主要元件之一,它維持腸粘膜屏障的穩(wěn)定性,引發(fā)由于感染的早期炎癥,并且可以調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的激活。大多數(shù)IEL都處于部分激活的狀態(tài),激活的IEL可以很快的反應(yīng)各種刺激,所以IEL必須精密的控制才能不會(huì)引發(fā)不需要的免疫反應(yīng)。AHR可以抑制腸道炎癥而IL-7可以引發(fā)慢性腸炎,并且它們都對(duì)腸道免疫的關(guān)鍵元件iel有重要影響。我們研究ahr被它的配體ficz激動(dòng)后對(duì)腸源性il-7表達(dá)的影響,對(duì)iel表型的影響以及帶來的腸道炎癥變化。方法1、建立小鼠dss腸炎模型,取腸道標(biāo)本,免疫熒光,western,rt-pcr檢測(cè)ahr,il-7的表達(dá)水平變化;流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)結(jié)腸iel表型變化。2、利用結(jié)腸lovo細(xì)胞用免疫熒光,western,rt-pcr檢測(cè)ficz處理后的ahr,il-7表達(dá)變化;用rna干擾技術(shù)干擾ahr,同樣方法檢測(cè)ficz處理后ahr,il-7的表達(dá)變化。3、用ahr激動(dòng)劑ficz處理小鼠dss腸炎模型,取腸道標(biāo)本,免疫熒光,western,rt-pcr檢測(cè)ahr,il-7的表達(dá)水平變化;流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)結(jié)腸iel表型變化;用結(jié)腸長(zhǎng)度,結(jié)腸he染色,小鼠體重變化,常見炎癥因子檢測(cè)小鼠腸道炎癥。主要結(jié)果1.與對(duì)照組相比,dss處理組ahr表達(dá)明顯下調(diào),而il-7表達(dá)明顯上調(diào)。在免疫熒光試驗(yàn)中,經(jīng)過腹腔注射ficz(1μg/只)5天的處理,小鼠dss誘導(dǎo)的腸炎模型表達(dá)更少的ahr但是更多的il-7。western,rt-pcr呈現(xiàn)出同樣的結(jié)果。2.用ficz(0.1μg/ml)處理正常的lovo細(xì)胞24h,與對(duì)照組相比ficz組表達(dá)更多的ahr更少的il-7。但是irna干擾ahr后同樣ficz處理并不能下調(diào)il-7。3.對(duì)照組小鼠體重一直在增長(zhǎng),但dss處理組從3~4天開始體重就開始下降,ficz+dss處理組體重同樣在3~4天開始下降,但是下降速率比dss處理組慢很多。對(duì)照組,dss組,dss+ficz組相應(yīng)的平均結(jié)腸長(zhǎng)度是8cm,5cm,6cm。結(jié)腸he染色結(jié)果顯示,dss組結(jié)腸損傷嚴(yán)重,ficz+dss組結(jié)腸損傷程度次之,對(duì)照組結(jié)腸無損傷。4.與對(duì)照組相比,dss組小鼠結(jié)腸檢測(cè)出更多的cd8αβ+iel,cd8+和cd4+iel亞群但是ficz+dss組小鼠結(jié)腸cd8αβ+iel,cd8+和cd4+iel亞群數(shù)量并不多。與對(duì)照組相比dss組小鼠結(jié)腸tcrγδ+iel亞群數(shù)量明顯減少,但是ficz+dss組小鼠結(jié)腸tcrγδ+iel亞群數(shù)量明顯增多。5.與對(duì)照組相比,dss組cd4和cd8活化程度明顯升高,但是ficz+dss組cd4和cd8活化程度與對(duì)照組類似。結(jié)論1.ahr可以下調(diào)腸炎模型和lovo細(xì)胞il-7表達(dá)水平。2.ahr被ficz激動(dòng)后可以減輕腸炎模型的炎癥。3.ahr被ficz激動(dòng)后比較大程度上改變了腸炎模型的iel表型并且減少了腸炎模型IEL CD4,CD8的活化數(shù)量。5.AHR及其激動(dòng)劑Ficz在腸炎治療中有可能是有益的。
【關(guān)鍵詞】：芳香烴受體 白介7 Ficz 炎性腸病 腸道免疫
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R574
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 英文摘要7-11
• 中文摘要11-14
• 第一章 前言14-16
• 第二章 小鼠腸炎模型AHR和IL-7 表達(dá)變化探索16-31
• 2.1 材料與方法16-28
• 2.2 結(jié)果28-29
• 2.3 討論29-31
• 第三章 AHR對(duì)IL-7 的作用和機(jī)制研究31-48
• 3.1 材料與方法31-45
• 3.2 結(jié)果45-47
• 3.3 討論47-48
• 第四章 AHR在減輕小鼠炎癥中的作用48-62
• 4.1 材料與方法48-59
• 4.2 結(jié)果59-61
• 4.3 討論61-62
• 第五章 AHR對(duì)小鼠腸炎模型IEL的作用62-71
• 5.1 材料與方法63-66
• 5.2 結(jié)果66-68
• 5.3 討論（總體）68-71
• 全文結(jié)論71-72
• 參考文獻(xiàn)72-75
• 文獻(xiàn)綜述 1 AHR AND IMMNUNITY75-107
• 參考文獻(xiàn) 193-107
• 文獻(xiàn)綜述 2 IL-7 AND IMMNUNITY107-125
• 參考文獻(xiàn) 2116-125
• 博士研究生期間撰寫和發(fā)表的文章125-126
• 致謝126

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本文編號(hào)：604646