發(fā)布時(shí)間：2017-07-29 19:32

  本文關(guān)鍵詞：PNPLA3基因多態(tài)性與乙型肝炎病毒相關(guān)性肝細(xì)胞癌的相關(guān)性及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： PNPLA3 基因多態(tài)性 肝細(xì)胞癌 Hep G2.2.15

【摘要】：肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)個(gè)體之間發(fā)病率及疾病進(jìn)程的不同,提示遺傳因素在HCC發(fā)生發(fā)展過(guò)程中至關(guān)重要。目前有研究證實(shí)PNPLA3rs738409[G](編碼:I148M)位點(diǎn)多態(tài)性和許多疾病所致的HCC相關(guān)聯(lián),但是PNPLA3 I148M基因多態(tài)性是否是導(dǎo)致HCC的獨(dú)立因素,如何引起肝臟損傷的機(jī)理目前仍不明確。本課題通過(guò)人群水平、細(xì)胞水平及分子水平系統(tǒng)地探討了PNPLA3 rs738409多態(tài)性位點(diǎn)對(duì)HCC的作用及可能的作用機(jī)制,以期驗(yàn)證PNPLA3 rs738409多態(tài)性位點(diǎn)與青島漢族人群中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)相關(guān)HCC的相關(guān)性,進(jìn)而闡明此多態(tài)性及相關(guān)的遺傳因素對(duì)HBV相關(guān)性HCC患者的影響。首先,本文在人群水平研究了青島地區(qū)漢族人群中PNPLA3 I148M基因多態(tài)性與HBV相關(guān)性HCC的相關(guān)性。臨床收集了230例HBV相關(guān)性HCC患者及219例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者的血液樣本并進(jìn)行PNPLA3基因型檢測(cè)及相關(guān)分析,同時(shí)選取254例健康人群作為對(duì)照組,同時(shí)進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)。結(jié)果提示,PNPLA3 rs738409 G等位基因的頻率分布在HCC組為24.3%,CHB組為12.8%,健康對(duì)照組為7.17%,各組間比較時(shí)均有明顯差異(P0.05)。非條件Logistic回歸分析顯示,與攜帶CC基因的人群相比,攜帶G基因的人群發(fā)生HCC的比值比(OR)是3.974(95%CI:2.712-5.824,P=0.000),發(fā)生CHB的OR為1.700(95%CI:1.179-2.451,P=0.004)。調(diào)整性別、年齡因素后,發(fā)生HCC的OR為4.099(95%CI:2.783-6.036,P=0.000),發(fā)生CHB的OR為1.709(95%CI:1.182-2.471,P=0.004)。HCC組中,血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素、總膽固醇、總膽汁酸水平在突變型基因組高于野生型CC基因組(P0.05)。CHB組中,血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、甘油三酯、總膽固醇、總膽汁酸水平在突變型基因組高于野生型CC基因組(P0.05)。上述的結(jié)果提示,青島的漢族人群中,PNPLA3 rs738409[G]I148M基因多態(tài)性與HCC及CHB的發(fā)生發(fā)展相關(guān),與肝臟損傷相關(guān)。其次,本文通過(guò)體外實(shí)驗(yàn),在細(xì)胞和分子水平對(duì)PNPLA3 I148M的作用機(jī)制進(jìn)行探討。在成功構(gòu)建PNPLA3野生型及I148M突變型慢病毒過(guò)表達(dá)載體后分別轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞株Hep G2.2.15,對(duì)HBV DNA表達(dá)量、促炎因子IL-8及抑癌基因p53在m RNA及蛋白水平的表達(dá)差異分別進(jìn)行檢測(cè)。研究結(jié)果顯示PNPLA3蛋白在野生型及突變型中都表現(xiàn)為過(guò)表達(dá)。PNPLA3 I148M突變組HBV DNA病毒載量及IL-8表達(dá)高于對(duì)照組及野生型組,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),提示PNPLA3I148M對(duì)HBV病毒載量和IL-8表達(dá)無(wú)顯著性影響。然而p53的表達(dá)在m RNA及蛋白水平均顯著升高。研究結(jié)果提示,PNPLA3 I148M基因多態(tài)性可通過(guò)調(diào)節(jié)抑癌基因p53的表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞產(chǎn)生影響。更為深入的作用機(jī)制則需要進(jìn)一步的研究探討,從而為日后開展HBV防治的個(gè)體化精準(zhǔn)醫(yī)療提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支持。
【關(guān)鍵詞】：PNPLA3 基因多態(tài)性 肝細(xì)胞癌 Hep G2.2.15
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7;R512.62
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-8
• 第一章 PNPLA3 I148M基因多態(tài)性與乙型肝炎病毒相關(guān)性肝細(xì)胞癌的相關(guān)性研究8-40
• 引言8-10
• 第一節(jié) 試驗(yàn)資料和方法10-20
• 1.1 受試者10-13
• 1.2 設(shè)備和儀器13-14
• 1.3 分子生物學(xué)相關(guān)試劑14
• 1.4 試驗(yàn)步驟14-17
• 1.5 統(tǒng)計(jì)分析17-19
• 1.6 試驗(yàn)的路線圖19-20
• 第二節(jié) 結(jié)果20-30
• 2.1 一般特征比較20
• 2.2 各項(xiàng)生化指標(biāo)的比較20-22
• 2.3 肝細(xì)胞癌及慢性乙型肝炎與PNPLA3 I148M基因多態(tài)性的相關(guān)性分析22-30
• 第三節(jié) 討論30-35
• 3.1 全基因組關(guān)聯(lián)分析與肝細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)制30-32
• 3.2 肝細(xì)胞癌與PNPLA3 I148M基因多態(tài)性的關(guān)系32-34
• 3.3 目前存在的問(wèn)題與未來(lái)的展望34-35
• 第四節(jié) 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 第二章 PNPLA3 I148M基因多態(tài)性在體外培養(yǎng)肝細(xì)胞中的作用研究40-69
• 引言40-41
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)資料41-45
• 1.1 質(zhì)粒、菌株、細(xì)胞和主要試劑41-42
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備42-43
• 1.3 試劑的配制43-45
• 第二節(jié) 方法45-54
• 2.1 人肝癌細(xì)胞株Hep G2.2.15的培養(yǎng)45-46
• 2.2 慢病毒載體構(gòu)建46-49
• 2.3 慢病毒包裝49-50
• 2.4 慢病毒感染Hep G2.2.15細(xì)胞50
• 2.5 檢測(cè)細(xì)胞上清液中HBV的量50-51
• 2.6 RT-PCR檢測(cè)PNPLA3、炎癥因子、凋亡因子的mRNA量51-52
• 2.7 Western blot檢測(cè)PNPLA3蛋白、炎癥因子、凋亡因子過(guò)表達(dá)52-54
• 第三節(jié) 結(jié)果54-63
• 第四節(jié) 討論63-65
• 第五節(jié) 結(jié)論65-66
• 參考文獻(xiàn)66-69
• 結(jié)論69-70
• 文獻(xiàn)綜述70-98
• 1 PNPLA3概述71-72
• 2 PNPLA3功能鑒定及結(jié)構(gòu)特征72-73
• 3 PNPLA3的生物學(xué)特征73-76
• 4 PNPLA3與肝臟損傷及肝纖維化76-79
• 5 PNPLA3與肝細(xì)胞癌79-84
• 6 PNPLA3 I148M基因多態(tài)性的作用與種族及性別的關(guān)系84-85
• 7 PNPLA3的分子研究85-86
• 8 總結(jié)86-87
• 參考文獻(xiàn)87-98
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果98-99
• 致謝99-100

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