本文關(guān)鍵詞：益生菌干預(yù)重癥急性胰腺炎大鼠回腸差異性蛋白研究

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【摘要】：目的:通過建立重癥急性胰腺炎大鼠模型,比較急性重癥胰腺炎組、益生菌干預(yù)組與假手術(shù)組大鼠腸道差異性表達(dá)蛋白,篩選特異性表達(dá)蛋白為SAP發(fā)生時(shí)腸黏膜屏障損傷機(jī)制的研究提供依據(jù),同時(shí)也為益生菌預(yù)防及治療重癥急性胰腺炎腸粘膜屏障損傷提供新的理論依據(jù)及蛋白分子靶點(diǎn)。方法:(1)54只健康8周齡雄性SD大鼠,體重250~300g,隨機(jī)分為3組;假手術(shù)組(SO組,n=18)、重癥急性胰腺炎組(SAP組,n=18)、益生菌治療組(YSJ組,n=18)。(2)SO組打開腹腔并翻動(dòng)胰腺,并關(guān)腹。用3%�；悄懰徕c進(jìn)行SAP大鼠模型制備。YSJ組為SAP大鼠動(dòng)物建模成功待麻醉清醒后,10%益生菌溶液制劑灌胃,共給藥2次,SAP組大鼠用生理鹽水灌胃2次。(3)三組大鼠在24h時(shí)間點(diǎn)處死動(dòng)物后取胰腺、回腸組織及大鼠腹腔靜脈血標(biāo)本。(4)胰腺和回腸組織HE染色:胰腺組織使用kusske標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理評(píng)分,觀察胰腺損傷程度;回腸組織使用改良的Chiu氏評(píng)分法評(píng)價(jià)腸粘膜損傷程度。(5)采集各組回腸組織標(biāo)本,提取蛋白,進(jìn)行蛋白變性、還原及酶解,然后進(jìn)行iTRAQ標(biāo)記結(jié)合納升級(jí)反相液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(nanoRPLC-MS/MS)技術(shù)對(duì)各組樣本提取的蛋白進(jìn)行鑒定及生物信息學(xué)分析。(6)數(shù)據(jù)整理分析:收集的數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,樣本均數(shù)采用方差分析假設(shè)檢驗(yàn),P㩳0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;差異蛋白篩選通過R軟件采用t test計(jì)算其顯著性指數(shù)(p-Value),分別采用p-value0.05且Fold change1.5或Foldchange0.6667進(jìn)行差異蛋白篩選。結(jié)果:(1)成功制作出SAP大鼠模型,胰腺組織發(fā)生典型病理學(xué)改變。(2)SAP組和YSJ組胰腺的病理評(píng)分高于假手術(shù)組(SO組)(P㩳0.05),YSJ組胰腺病理評(píng)分低于SAP組(P㩳0.05)。(3)SAP組在回腸組織的病理評(píng)分高于SO組(P㩳0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㧐0.05)。YSJ組的病理評(píng)分低于SAP組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P(27)0.05);(4)SAP組和YSJ組D-乳酸及內(nèi)毒素均高于假手術(shù)組(SO組)(P㩳0.05),YSJ組D-乳酸及內(nèi)毒素均低于SAP組(P㩳0.05)。(5)SAP組與SO組間共篩選37個(gè)顯著差異蛋白,6個(gè)蛋白質(zhì)上調(diào),31個(gè)蛋白質(zhì)下調(diào);YSJ組與SO組間共篩選出94個(gè)差異蛋白,6個(gè)蛋白質(zhì)上調(diào),88個(gè)蛋白質(zhì)下調(diào);在YSJ組與SAP組共同存在7個(gè)差異蛋白,分別為閉鎖小帶蛋白1(ZO-1)、腸粘液素樣蛋白(Intestinal mucin-like protein)、伴侶蛋白10(Chaperonin10)、胞漿型磷脂酶A2(Cytosolic phospholipase A2)、結(jié)蛋白(Desmin)、腸凝集素1(Intelectin1)、轉(zhuǎn)膠蛋白(Transgelin)。(7)免疫組化驗(yàn)證顯示,ZO-1蛋白在SAP組較SO組表達(dá)下調(diào)(P(27)0.05),而YSJ組較SAP組表達(dá)上調(diào)。結(jié)論:基于iTRAQ技術(shù)的差異蛋白研究為SAP腸道黏膜屏障損傷機(jī)制的研究提供依據(jù),同時(shí)也能夠較好地反應(yīng)益生菌對(duì)SAP大鼠回腸組差異蛋白的影響,篩選出的差異蛋白有可能為益生菌治療SAP提供新的理論依據(jù),同時(shí)也可能是干預(yù)治療的靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：益生菌 重癥急性胰腺炎 腸黏膜屏障 iTRAQ
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R576
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 前言9-12
• 材料與方法12-22
• 結(jié)果22-45
• 討論45-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 中英文對(duì)照表62-63
• 致謝63-64
• 腸黏膜屏障損傷與緊密連接蛋白ZO-1 的關(guān)系及防治研究進(jìn)展（綜述）64-73
• 參考文獻(xiàn)70-73

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