本文關鍵詞：EGCG和PC-B2對AFB_1致肝細胞DNA損傷的保護作用與機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：黃曲霉毒素(Aflatoxin, AFT)中以黃曲霉毒素B1(AFB1)最常見、毒性最大、致癌性最強,主要損害肝臟并易誘發(fā)肝癌,屬于Ⅰ類強致癌物。在抵抗AFB1毒作用的藥物研究中,植物多酚類化學物(Polyphenols Phytochemicals)愈來愈受到人們的關注。表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin Gallate, EGCG)作為綠茶主要活性成分,具有抗氧化、抗突變、誘導癌細胞凋亡、提高機體免疫力的效果,是兒茶素類化合物中生物學效應最強的一種。原花青素B2(PC-B2)是植物界中一類廣泛存在的天然多酚類化合物,屬于強抗氧化劑,可以有效清除人與動物體內(nèi)多余的自由基,保護細胞及組織免受氧化損傷。PC-B2藥理作用廣泛,具有保護心血管、預防高血壓、抗輻射、抗突變、抗腫瘤等作用。本研究擬通過體外細胞培養(yǎng)實驗平臺,探討E GCG與PC-B2對AFB1染毒后的人胚肝細胞DNA損傷的保護作用,具體研究過程如下：第一部分AFB1對L-02細胞生存率、凋亡率及DNA損傷的影響目的探討不同濃度AFB1對體外培養(yǎng)人胚肝細胞(L-02細胞)生存率、凋亡率及DNA損傷的影響。方法體外培養(yǎng)L-02細胞,采用AFB1進行干預,AFB1用藥濃度分別為：0、5、10、20、40、80mg/L AFB1。倒置顯微鏡觀察各組細胞形態(tài)學的變化,用MTT法測定細胞的存活率,用流式細胞儀檢測細胞凋亡率,采用單細胞凝膠電泳試驗(SCGE)觀察細胞DNA損傷情況。結果與對照組比較,10mg/L及以上濃度AFB1干預48h后細胞形態(tài)發(fā)生變化,低濃度下表現(xiàn)為細胞皺縮、體積變小,高濃度下細胞皺縮變?yōu)閳A形,出現(xiàn)大量漂浮細胞及細胞碎片,形態(tài)學變化的程度與AFB1濃度有關。10mg/L及以上濃度AFB1作用48h后存活率均明顯低于對照組(P0.05)；5mg/L及以上濃度AFB1作用48h后凋亡率均明顯高于對照組(P0.05)；且10mg/L及以上濃度AFB1干預存在劑量-效應關系,隨著AFB1作用濃度的增加,L-02細胞存活率減少(P0.05),凋亡率增加(P0.05)。SCGE實驗結果顯示：與對照組比較,AFB1作用L-02細胞48h后,10mg/L及以上濃度組細胞彗星尾部DNA百分率、Olive尾距增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),并且呈劑量-效應關系,隨著AFB1濃度的增加,L-02細胞的DNA損傷增大。結論10mg/L及以上濃度AFB1有細胞毒性、抑制細胞生長以及損傷細胞的DNA的作用；5mg/L及以上濃度AFB1能提高細胞凋亡率；隨著AFB1濃度的升高,呈現(xiàn)劑量-效應關系；40mg/L濃度AFB1能有效抑制細胞生長、造成較嚴重的細胞DNA損傷,但不至于立刻導致細胞死亡,因而40mg/L濃度被選為后續(xù)試驗的參考濃度。第二部分EGCG與PC-B2對AFB1致L-02細胞生存率、凋亡率、DNA損傷以及Bc1-2、Bax、caspase-3、caspase-9、P53基因表達的影響目的探討EGCG與PC-B2對AFB1致體外培養(yǎng)人胚肝細胞(L-02細胞)生存率、凋亡率、DNA損傷以及、Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9、P53基因表達的影響。方法體外培養(yǎng)L-02細胞,實驗設立6組：(1)空白對照組：L-02細胞僅給予培養(yǎng)液；(2)溶劑對照組給予加2%DMSO溶劑的培養(yǎng)液；(3)AFB1染毒組：L-02細胞經(jīng)40mg/L的AFB1單獨作用；(4) EGCG組：L-02細胞在AFB1染毒同時給予50mg/L的EGCG作用；(5)PC-B2組：L-02細胞在AFB1染毒同時給予200 mg/L的PC-B2;(6)EGCG與PC-B2組：L-02細胞在AFB1染毒同時給予5Om g/L的EGCG與200 mg/L的PC-B2。以上各組2天換液一次,3-5天傳代一次,一周后,觀察各組細胞形態(tài)學的變化,用MTT法測定細胞的存活率,用流式細胞儀檢測細胞凋亡率,采用單細胞凝膠電泳試驗(SCGE)觀察細胞DNA損傷情況,采用Western blot法分析Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9、P53 5個基因的表達。結果(1)與對照組比較,AFB1染毒組能顯著抑制L-02細胞生長,EGCG與PC-B2均能降低AFB1對細胞的生長抑制作用,使生長抑制率從61.12%降至42.18%和46.72%; EGCG與PC-B2聯(lián)用則使AFB1對肝細胞的生長抑制率從61.12%降至37.15%。SCGE實驗結果表明EGCG與PC-B2單用／聯(lián)用均能減小AFB1引起的L-02細胞DNA損傷(P0.05),其彗星Olive尾矩值分別為AFB1染毒組9.72±2.64,EGCG組5.91+1.79,PC-B2組5.36+1.17；EGCG+PC-B2組4.47+1.27。實驗各組L-02細胞經(jīng)處理后,早期凋亡率(%)分別為空白對照組2.63±0.28,溶劑對照組3.01+0.45,AFB1染毒組13.63+3.79,EGCG組8.26±1.67,PC-B2組7.89+1.52,EGCG+PC-B2組4.68±0.51,實驗結果呈顯著性差異(P0.05)；與溶劑對照組相比,AFB1染毒組能上調(diào)caspase-3、 caspase-9的表達(P0.05),下調(diào)bcl-2/ Bax(P0.05)；而EGCG組與PC-B2組中表明,EGCG與PC-B2單用均能下調(diào)caspase-3、caspase-9的表達(P0.05),顯著上調(diào)bcl-2/Bax(P0.05),而EGCG與PC-B2兩者聯(lián)用時,對caspase-3、caspase-9、bcl-2/Bax的影響更為顯著(P0.05)；無論是EGCG與PC-B2單用還是聯(lián)用,對P53的表達水平影響不明顯。結論AFB1能顯著抑制L-02肝細胞的生長,并使細胞的DNA損傷程度加重；EGCG與PC-B2單用或聯(lián)用可提高細胞的生存率,降低細胞凋亡率與DNA損傷程度；EGCG與PC-B2對AFB1長時間暴露的L-02細胞caspase-3、caspase-9基因的表達顯著下調(diào),bcl-2/B ax比值顯著升高,EGCG與PC-B2能降低AFB1致L-02細胞DNA損傷與細胞凋亡率,其作用機制可能與下調(diào)caspase-3、 caspase-9的表達,升高bcl-2/Bax比值有關。
【關鍵詞】：EGCG PC-B2 AFB_1 L-02細胞 肝細胞損傷 基因表達
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R575
【目錄】：

• 個人簡歷3-5
• 縮寫詞匯中英文對照表5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-14
• 前言14-16
• 第一部分 AFB_1對L-02細胞生存率、凋亡率及DNA損傷的影響16-35
• 1 材料與方法17-22
• 2 結果22-28
• 3 討論28-29
• 參考文獻29-35
• 第二部分 EGCG與PC-B2對AFB1致L-02細胞生存率、凋亡率、DNA損傷以及Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9、P53基因表達的影響35-54
• 1 材料與方法36-45
• 2 結果45-52
• 3 討論52-54
• 全文總結54-55
• 參考文獻55-59
• 綜述59-72
• 參考文獻64-72
• 致謝72

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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  本文關鍵詞：EGCG和PC-B2對AFB_1致肝細胞DNA損傷的保護作用與機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：445359