目的探討含SH2結(jié)構(gòu)域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(src-homology domain 2-containing protein tyrosine phosphatase 2,SHP2)對體外活化肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells,HSC)凋亡的影響。方法通過反復(fù)感染AD293細(xì)胞,擴(kuò)增攜帶野生型SHP2(PTPN11)基因并表達(dá)綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重組腺病毒Ad-SHP2、攜帶靶向SHP2的RNA干擾序列[短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA,shRNA)]并表達(dá)GFP的重組腺病毒Ad-shRNA/SHP2及僅表達(dá)GFP的對照空病毒Ad-GFP;體外培養(yǎng)人肝星狀細(xì)胞系LX-2,將重組腺病毒Ad-SHP2、Ad-shRNA/SHP2及對照空病毒Ad-GFP分別轉(zhuǎn)染LX-2細(xì)胞;應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測活化HSC的SHP2 mRNA表達(dá);應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測活化HSC的SHP2、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá);采用末段脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧三磷酸尿苷缺口末段標(biāo)記(terminal ...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
引言
第1章 實(shí)驗研究
    1.1 實(shí)驗材料
        1.1.1 實(shí)驗材料
        1.1.2 重組腺病毒
        1.1.3 主要試劑
        1.1.4 主要試劑配制
        1.1.5 主要實(shí)驗儀器
    1.2 實(shí)驗方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 腺病毒擴(kuò)增及滴度測定
        1.2.3 腺病毒轉(zhuǎn)染體外活化HSC
        1.2.4 Westernblot實(shí)驗檢測體外活化HSC的 SHP2、Bax、Bcl-2 蛋白表達(dá)
        1.2.5 實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測體外活化HSC的 SHP2表達(dá)
        1.2.6 TUNEL法檢測體外活化HSC凋亡
        1.2.7 膜聯(lián)蛋白-V及碘化丙啶雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測體外活化HSC凋亡
        1.2.8 統(tǒng)計學(xué)方法
    1.3 實(shí)驗結(jié)果
        1.3.1 腺病毒擴(kuò)增
        1.3.2 腺病毒滴度
        1.3.3 腺病毒轉(zhuǎn)染HSC的轉(zhuǎn)染效率
        1.3.4 體外活化肝星狀細(xì)胞的SHP2過表達(dá)及低表達(dá)模型成功構(gòu)建
        1.3.5 TUNEL法檢測體外活化HSC凋亡
        1.3.6 膜聯(lián)蛋白-V及碘化丙啶雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測HSC凋亡
        1.3.7 SHP2表達(dá)變化對體外活化HSCBax表達(dá)的影響
        1.3.8 SHP2表達(dá)變化對體外活化HSCBcl-2 表達(dá)的影響
    1.4 討論
        1.4.1 SHP2對腫瘤細(xì)胞凋亡的影響
        1.4.2 SHP2表達(dá)變化對體外活化肝星狀細(xì)胞凋亡的影響
        1.4.3 SHP2影響體外活化肝星狀細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制
    1.5 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第2章 綜述 SHP2與肝臟疾病研究進(jìn)展
    2.1 SHP2的結(jié)構(gòu)及活性調(diào)節(jié)
    2.2 SHP2的生物學(xué)功能及參與的信號傳導(dǎo)通路
        2.2.1 SHP2的生物學(xué)功能
        2.2.2 SHP2參與的信號傳導(dǎo)通路
    2.3 SHP2與肝細(xì)胞癌
    2.4 SHP2與非腫瘤性肝臟疾病
    2.5 結(jié)語
    參考文獻(xiàn)
結(jié)論
致謝
導(dǎo)師簡介
作者簡介
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集



本文編號：3979664