乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)感染仍舊是中國(guó)乃至全球極為重大的公共衛(wèi)生與健康問(wèn)題,平均每年死于該病毒感染的人口大約有一百萬(wàn)。目前全世界累計(jì)有20億左右的人口感染過(guò)或者正在感染HBV,其中有3500萬(wàn)人屬于慢性乙肝患者,肝臟內(nèi)病毒的復(fù)制與病毒復(fù)制所誘導(dǎo)的長(zhǎng)期炎癥反應(yīng)使得這些人群更加容易受到肝硬化,肝癌和肝衰竭等疾病的嚴(yán)重威脅。據(jù)悉,全世界超過(guò)50%的肝癌都是由HBV感染造成的,其中丁型肝炎病毒(Hepatitis D virus, HDV)和HBV共同感染的患者的病情惡化尤為快速和嚴(yán)重。盡管有高效的疫苗和一定的治療手段,乙型肝炎的防治工作任重而道遠(yuǎn),現(xiàn)有的防治體系仍面臨著巨大的挑戰(zhàn),同時(shí)HDV感染的治療手段也是很缺乏的。因此,對(duì)HBV的基礎(chǔ)研究急需進(jìn)一步深入和加強(qiáng),其中HBV對(duì)細(xì)胞早期入侵過(guò)程中的分子機(jī)制的探索和研究顯得尤為迫切和重要。 在體內(nèi)HBV只能感染人,黑猩猩和類靈長(zhǎng)類小動(dòng)物樹鼩(Tupaia belangeri chinenesis, Northern Treeshrew)。可以被HBV體外感染的細(xì)胞只有少數(shù)幾種,其中原代樹鼩肝細(xì)胞(Primary...

【文章頁(yè)數(shù)】：93 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一章 前言
    第一節(jié) HBV概述
        1.1 HBV的發(fā)現(xiàn)過(guò)程及其種屬歸類
        1.2 HBV的血清型和基因型
        1.3 HBV的基因組結(jié)構(gòu)及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控
    第二節(jié) HBV感染模型及其研究意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法
    第一節(jié) 樹鼩的飼養(yǎng)
    第二節(jié) PTH的分離純化與培養(yǎng)
        2.1 灌注用手術(shù)器械等實(shí)驗(yàn)器材的準(zhǔn)備
        2.2 灌注母液的配置
        2.3 PTH貼壁培養(yǎng)基配方
        2.4 PTH維持培養(yǎng)基配方
        2.5 用大鼠鼠尾Ⅰ型膠原包被細(xì)胞培養(yǎng)皿
        2.6 兩步法PTH灌注流程
        2.7 樹鼩肝星狀細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
        2.8 細(xì)胞凍存與復(fù)蘇
        2.9 樹鼩原代成纖維細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
        2.10 PTH或者Huh7與HSC或者PTF細(xì)胞的共同培養(yǎng)
    第三節(jié) HBV,HDV和WMHBV的制備
        3.1 從病人血清中超速離心純化HBV
        3.2 Huh7細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.3 用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法從Huh7細(xì)胞中制備HDV
        3.4 用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法從Huh7細(xì)胞中制備HBV或者WMHBV
        3.5 HDV的濃縮與純化方式介紹
        3.6 確定HDV的濃度
    第四節(jié) 三種病毒對(duì)PTH的侵染和侵染標(biāo)志物的檢測(cè)
        4.1 HBV侵染PTH實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介
        4.2 HDV和WMHBV侵染PTH實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介
        4.3 ELISA檢測(cè)HBsAg或者HBeAg
        4.4 檢測(cè)PTH內(nèi)病毒RNA的表達(dá)
        4.5 用免疫熒光染色研究PTH內(nèi)病毒蛋白的表達(dá)情況
        4.6 用免疫印跡法研究PTH內(nèi)特定蛋白的表達(dá)
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析討論
    第一節(jié) PTH的分離與培養(yǎng)
        1.1 PTH分離的結(jié)果與討論
        1.2 PTH培養(yǎng)的細(xì)胞狀態(tài)和功能
        1.3 PTH對(duì)三種病毒的感染結(jié)果分析
        1.4 PTH體外感染模型的條件優(yōu)化
        1.5 PTH體外感染模型建立的意義
        1.6 HBV,HDV和WMHBV共同功能性受體的發(fā)現(xiàn),確定和意義
    第二節(jié) RTK-PI3K-AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑對(duì)病毒感染的作用
        2.1 EGFR和HGFR參與了HBV早期入侵的過(guò)程
        2.2 磷脂酰肌醇3激酶也參與了HBV早期入侵的過(guò)程
        2.3 蛋白激酶B也參與了HBV早期入侵的過(guò)程
        2.4 RTK-PI3K-AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與HBV入侵的機(jī)理探討
    第三節(jié) 探索HBV入侵所需的相關(guān)蛋白
        3.1 用免疫共沉淀的方法尋找HBV受體的介紹
        3.2 表達(dá)純化和修飾餌蛋白
        3.3 紫外光激活的共價(jià)交聯(lián)手段的運(yùn)用
        3.4 運(yùn)用光激活的共價(jià)交聯(lián)手段進(jìn)行親和純化的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
        3.5 將preS1-mFc表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到PTH后用Fc親和純化
    第四節(jié) 建立人NTCP的轉(zhuǎn)基因小鼠模型
小結(jié)
附錄
    中英文對(duì)照表
    59-RBD-his蛋白序列
參考文獻(xiàn)
論文發(fā)表和專利申請(qǐng)
致謝



本文編號(hào)：3948407