一、研究背景非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)包括肝細胞單純性脂肪變、非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis,NASH)及由其進展的肝纖維化和肝硬化[1]。由于肥胖和代謝綜合癥發(fā)病率快速增加,NAFLD成為全世界范圍內(nèi)最主要的慢性肝病之一。與單純性脂肪變相比,NASH患者進展為終末期肝病的風險顯著增加。目前,NASH發(fā)生及發(fā)展為肝纖維化的分子機制尚未闡明,尚無特異性治療NASH及NASH相關肝纖維化的藥物。臨床及動物研究結果已證實,肝組織中性粒細胞浸潤增強是NASH的重要組織病理學特征之一[1]。中性粒細胞顆粒蛋白是中性粒細胞發(fā)揮免疫調(diào)控作用的重要因子。Micro RNA-223(miR-223)是一種在中性粒細胞中具有高豐度的micro RNA,其在多種炎癥狀態(tài)下調(diào)節(jié)中性粒細胞的活化及炎性反應。研究miR-223及中性粒細胞顆粒蛋白調(diào)控NASH相關肝纖維化的功能和分子機制對于深入揭示NASH進展為肝纖維化的關鍵病理生理機制以及發(fā)現(xiàn)藥物研發(fā)的新型、潛在靶點具有重要科學意義。二、研究目的...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 NASH相關的肝臟炎癥及肝纖維化
        1.1.1 NASH的概念及流行病學特征
        1.1.2 組織病理學特征及診斷標準
        1.1.3 發(fā)病機制
    1.2 中性粒細胞與肝臟天然免疫反應、肝臟代謝性炎癥及其纖維化
        1.2.1 中性粒細胞概述
        1.2.2 中性粒細胞與肝臟天然免疫反應
        1.2.3 中性粒細胞分泌的天然免疫介導因子
        1.2.4 中性粒細胞在NASH相關的肝臟炎癥及肝纖維化過程中發(fā)揮重要的生物學功能
    1.3 MiR-223與中性粒細胞功能、肝臟代謝性炎癥及肝纖維化
        1.3.1 Micro RNA及 miR-223 概述
        1.3.2 MiR-223調(diào)節(jié)中性粒細胞功能
        1.3.3 MiR-223在肝臟代謝性炎癥及纖維化過程中發(fā)揮重要功能
    1.4 擬解決科學問題及研究意義
    1.5 研究策略
第二章 實驗方法、實驗材料及儀器設備
    2.1 實驗方法
        2.1.1 動物來源及飼養(yǎng)環(huán)境
        2.1.2 樣品收集
        2.1.3 樣品處理
        2.1.4 病理學檢測
        2.1.5 蛋白檢測
        2.1.6 核酸檢測
        2.1.7 生化檢測
        2.1.8 肝非實質(zhì)細胞(non-parenchymal cell,NPC)的分離
        2.1.9 原代中性粒細胞分離、骨髓細胞分離
        2.1.10 雙熒光素酶報告基因檢測
    2.2 實驗材料
        2.2.1 飼料
        2.2.2 化學試劑
        2.2.3 抗體
        2.2.4 引物
    2.3 儀器設備
    2.4 溶液配方
第三章 NASH相關肝纖維化動物模型的誘導與評價
    3.1 引言
        3.1.1 NAFLD實驗動物模型研究的現(xiàn)狀與挑戰(zhàn)
        3.1.2 NAFLD理想動物模型的標準
        3.1.3 目前NASH的動物模型及其優(yōu)勢和局限
        3.1.4 研究目標與對策
    3.2 NASH相關肝纖維化模型的誘導方案及結果
        3.2.1 模型誘導方案
        3.2.2 模型誘導結果
    3.3 本章小結
第四章 MiR-223 介導NASH相關肝纖維化的病理生理學功能研究
    4.1 引言
    4.2 MiR-223 的肝內(nèi)豐度在CDAHFD飲食飼喂小鼠中顯著升高
    4.3 成功獲得miR-223 敲除(miR-223 KO或 miR-223-/-)小鼠
    4.4 MiR-223 缺失對CDAHFD飲食誘導的NASH肝臟炎癥及其相關肝纖維化的影響
        4.4.1 實驗方案
        4.4.2 檢測結果
    4.5 小結
第五章 MiR-223調(diào)控中性粒細胞肝臟浸潤及其介導的炎癥反應的功能研究
    5.1 引言
    5.2 MiR-223 缺失顯著增加CDAHFD飲食誘導小鼠中性粒細胞的肝臟浸潤
    5.3 MiR-223缺失導致中性粒細胞遷移能力增強
    5.4 MiR-223 缺失顯著增加CDAHFD飲食誘導小鼠肝臟中性粒細胞顆粒蛋白的表達
    5.5 多種祛濕化濁中藥可抑制免疫細胞中促炎性因子及顆粒蛋白的表達
    5.6 小結
第六章 MiR-223調(diào)控中性粒細胞顆粒蛋白表達的關鍵轉(zhuǎn)錄因子鑒定
    6.1 引言
    6.2 技術路線
    6.3 MiR-223調(diào)控中性粒細胞顆粒蛋白的關鍵轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄組結果
    6.4 MiR-223調(diào)控中性粒細胞顆粒蛋白的關鍵轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄組測序結果的驗證
    6.5 雙熒光素酶報告基因方法檢測miR-223與轉(zhuǎn)錄因子的相互作用
        6.5.1 實驗方案
        6.5.2 實驗結果
    6.6 MiR-223通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子影響中性粒細胞顆粒蛋白的表達
    6.7 小結
第七章 髓系細胞來源的miR-223在NASH相關肝纖維化中發(fā)揮重要功能
    7.1 引言
    7.2 骨髓嵌合型小鼠的獲得及NASH相關肝纖維化模型誘導
    7.3 野生型小鼠骨髓細胞嵌合改變miR-223 敲除小鼠經(jīng)CDAHFD飲食誘導的NASH肝臟炎癥及其相關肝纖維化
        7.3.1 野生型小鼠骨髓細胞嵌合改變miR-223 敲除小鼠經(jīng)CDAHFD飲食誘導的NASH組織病理學特征
        7.3.2 野生型小鼠骨髓細胞嵌合改變miR-223 敲除小鼠經(jīng)CDAHFD飲食誘導的肝纖維化
        7.3.3 野生型小鼠骨髓細胞嵌合改變miR-223 敲除小鼠經(jīng)CDAHFD飲食誘導的肝損傷
    7.4 野生型小鼠骨髓細胞嵌合不影響miR-223 敲除小鼠CDAHFD飲食誘導的肥胖代謝表型
    7.5 小結
第八章 結論與展望
    8.1 結論
    8.2 展望
參考文獻
附錄 縮略詞
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文



本文編號：3945715