目的:證實醛縮酶B作為乙型肝炎病毒主S蛋白結(jié)合蛋白一種候選蛋白,探討醛縮酶B生物學功能。 方法:(1)以人HEPG2細胞RNA為模板,用RT-PCR方法擴增出ALDOB基因。將PCR產(chǎn)物克隆進真核載體PCMV5內(nèi),構(gòu)建含ALDOB基因的重組真核表達質(zhì)粒。以實驗室重組全S質(zhì)粒為模板,利用PCR擴增主S蛋白基因,構(gòu)建PCMV4-Flag-主S基因表達質(zhì)粒,分別將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293FT細胞,用免疫熒光和Western blot等方法檢測ALDOB及主S在293FT細胞中的表達。(2)將兩種質(zhì)粒共轉(zhuǎn)293T細胞,激光共聚焦試驗明確主S蛋白和醛縮酶B空間定位。將主S基因表達質(zhì)粒穩(wěn)轉(zhuǎn)HepG2細胞,構(gòu)建主S穩(wěn)轉(zhuǎn)株,通過免疫共沉淀方法,驗證主S蛋白與醛縮酶B相互結(jié)合。(3)構(gòu)建靶向醛縮酶B重組干擾質(zhì)粒siALDOB-Pu6,導入HEPG2細胞中,篩選出干擾質(zhì)粒的穩(wěn)轉(zhuǎn)株。通過細胞增殖實驗、Transwell實驗、細胞凋亡實驗,探討ALDOB在肝癌細胞HepG2生長、侵襲、凋亡等方面的作用。 結(jié)果:(1)核酸序列分析的結(jié)果表明,克隆的ALDOB基因與主S基因在GenBank中分別與已登記基因序列100%...

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【學位級別】：碩士

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英文摘要
前言
材料與試劑
實驗方法
實驗結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：3810366