炎癥性腸病(IBD)是一種天然免疫性疾病。目前其發(fā)病機理尚不明確,臨床上尚無有效的治療藥物。Kallistatin(Kal)是一種血管生成抑制劑和肝素結合蛋白,其在生理和病理反應中有多種作用,如抗炎、抗血管生成等,被認為是腸炎、關節(jié)炎、損傷修復的候選藥物。 本實驗首先通過對兩種質粒的酶切鑒定,X-gal染色法和細胞免疫熒光法驗證了pAAV-LacZ質粒和pAAV-Kal質粒,及對細胞轉染鑒定了Kal可在細胞內表達。并利用電穿孔法將基因導入昆明小鼠體內,比較其與非電穿孔法介導的基因表達差異。同時檢測電穿孔介導的Kal在不同轉染濃度、不同時間的表達情況,并繪制不同轉染濃度下的表達曲線。使用電穿孔法介導Kal對三硝基苯磺酸(TNBS)誘導的小鼠IBD模型進行基因預防治療,通過檢測小鼠的體重變化、存活率、以及病理切片分析Kal對其治療效果。并通過組織免疫熒光法初步探討Kal在小鼠結腸炎中的抗炎機制。 研究結果顯示電穿孔介導Kal基因表達可以劑量依賴性的降低IBD模型的炎癥反應。結腸病理切片分析顯示,Kal可以降低單核細胞的侵襲,同時利用免疫熒光發(fā)現(xiàn)Kal多集中于炎癥區(qū),我們推測這可能說明Kal...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 Kallistatin 的研究進展
        1.1.1 Kallistatin 的特性及結構活性關系
        1.1.2 Kallistatin 的分布及調節(jié)
        1.1.3 Kallistatin 的功能
        1.1.4 總結及展望
    1.2 炎癥性腸病機制研究進展
        1.2.1 腸道微生物的“兩面性”
        1.2.2 保持腸道內平衡路徑的研究
        1.2.3 炎性體研究（Inflammsome）
        1.2.4 NOD2 的研究
        1.2.5 天然免疫、結腸炎和組織修復
    1.3 活體電穿孔的研究進展
        1.3.1 活體電穿孔的的原理和特點
        1.3.2 影響活體電穿孔效率的因素
        1.3.3 活體電穿孔在不同組織上的應用
        1.3.4 活體電穿孔與核酸免疫
        1.3.5 活體電穿孔與基因治療
        1.3.6 展望
第二章 pAAV-Kal 及pAAV-LacZ質粒的細胞內表達
    2.1 實驗材料、試劑與儀器
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 主要實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 主要試劑配制
        2.2.2 pAAV-Kal 及pAAV-LacZ 質粒的轉化及鑒定
        2.2.3 質粒的大量提取、純化及濃度測定
        2.2.4 細胞培養(yǎng)
        2.2.5 質粒表達鑒定
    2.3 實驗結果與分析
        2.3.1 pAAV-LacZ 及pAAV-Kal 酶切鑒定
        2.3.2 pAAV-LacZ 及pAAV-Kal 在細胞內表達
        2.3.3 小結
第三章 電穿孔介導pAAV-Kal 及pAAV-LacZ質粒在小鼠體內的表達
    3.1 實驗材料、試劑與儀器
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 主要實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 主要試劑配制
        3.2.2 活體電穿孔法介導LacZ 質粒在小鼠體內的表達
        3.2.3 活體電穿孔法轉導pAAV-Kal 質粒在小鼠體內的表達
        3.2.4 實驗數(shù)據分析
    3.3 實驗結果及分析
        3.3.1 活體電穿孔法介導LacZ 質粒在小鼠體內的表達
        3.3.2 活體電穿孔法介導pAAV-Kal 質粒在小鼠體內的表達
    3.4 討論
第四章 Kal 對小鼠結腸炎的預防治療作用
    4.1 實驗材料、試劑與儀器
        4.1.1 實驗材料及儀器
        4.1.2 實驗試劑
    4.2 實驗方法
        4.2.1 主要試劑配制
        4.2.2 動物模型建立及給藥
        4.2.3 Kal 對腸炎小鼠預防作用
        4.2.4 數(shù)據分析
    4.3 實驗結果與分析
        4.3.1 小鼠體重變化及死亡率
        4.3.2 模型小鼠結腸長度變化
        4.3.3 小鼠結腸組織病理切片及免疫熒光分析
    4.4 討論
結論
論文創(chuàng)新點
發(fā)表論文及參加會議情況
參考文獻
致謝



本文編號：3777773