目的:干細(xì)胞衰老是衰老相關(guān)疾病發(fā)生的基礎(chǔ)。隨著衰老的發(fā)生,老年人的腸道穩(wěn)態(tài)難以維持,腸道疾病如腸道腫瘤的發(fā)生率急劇增加,腸道受損后修復(fù)再生能力減弱,這表明衰老腸干細(xì)胞（Intestinal Stem Cells,ISCs）的核心功能發(fā)生改變。然而,目前對(duì)自然衰老過程中腸干細(xì)胞自我更新與分化等核心功能到底有何異常及其調(diào)控機(jī)制尚不清楚。本研究主要研究衰老腸干細(xì)胞自我更新與分化功能的作用,從而探索腸干細(xì)胞衰老的機(jī)制及其延緩衰老的途徑。方法:取24月齡（old）和2月齡（young）小鼠的全小腸進(jìn)行隱窩分離,在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)體系中進(jìn)行隱窩培養(yǎng)。分別于第7天和第10天觀察隱窩培養(yǎng)的表型、統(tǒng)計(jì)腸類器官的生長(zhǎng)總量,并取培養(yǎng)第7天的ISCs通過qRT-PCR技術(shù)對(duì)ISCs分化基因（including Alpi、Atoh1、Defa24、Chga）表達(dá)水平及Wnt信號(hào)靶基因（Axin2、Ascl2）表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。在第10天進(jìn)行傳代培養(yǎng),以及傳代培養(yǎng)后第4天觀察隱窩培養(yǎng)表型、統(tǒng)計(jì)腸類器官生長(zhǎng)總量。通過觀察隱窩培養(yǎng)的表型、腸類器官生長(zhǎng)總量的統(tǒng)計(jì)及qRT-PCR結(jié)果分析衰老小鼠ISCs的分化功能,及與年輕小鼠I... 

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 基本材料
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 qRT-PCR引物序列
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        2.2.1 腸隱窩分離
        2.2.2 腸隱窩培養(yǎng)
        2.2.3 RNA的提取與c DNA的合成
        2.2.4 qRT-PCR
        2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第3章 結(jié)果
    3.1 衰老ISCs在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)體系培養(yǎng)
        3.1.1 老年小鼠ISCs在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)體系的原代培養(yǎng)
        3.1.2 老年小鼠ISCs在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)體系的傳代培養(yǎng)
        3.1.3 標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)體系中老年小鼠ISCs的 Wnt信號(hào)水平
    3.2 降低培養(yǎng)體系中R-spondin-1 后衰老ISCs的培養(yǎng)
        3.2.1 降低培養(yǎng)體系中R-spondin-1 濃度后衰老ISCs的 Wnt信號(hào)水平
        3.2.2 降低培養(yǎng)體系中R-spondin-1 濃度后衰老ISCs的原代培養(yǎng)
        3.2.3 降低培養(yǎng)體系中R-spondin-1 濃度后衰老ISCs的傳代培養(yǎng)
    3.3 在培養(yǎng)體系中添加Wnt3a后衰老ISCs的培養(yǎng)
第4章 討論
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3730486