背景/目的酒精濫用可引發(fā)酒精性肝�。ˋlcoholic liver disease,ALD）,近年來,由于ALD的發(fā)生率和死亡率持續(xù)不斷的增加,給中國和全世界的國家都造成了很大的經(jīng)濟負擔,但是即使經(jīng)過研究人員多年的實驗研究,目前我們對ALD的發(fā)病機制仍舊不是很清楚。骨形態(tài)發(fā)生蛋白9（Bone Morphogenetic Protein 9,BMP9）是TGFβ超級家族的成員之一,主要是由肝臟星狀細胞產(chǎn)生的,與多種肝臟疾病密切相關(guān),例如BMP9可抑制肝再生,促進肝纖維化和肝癌等。但是由于人們對于BMP9在ALD發(fā)生發(fā)展過程的作用卻仍不清楚,于是本課題通過基因敲除技術(shù)全身性敲除小鼠的BMP9基因,以探究BMP9在ALD發(fā)生發(fā)展過程中作用。方法1. 本課題組利用C57BL/6J野生型（Wild type,WT）小鼠構(gòu)建全身性BMP9基因敲除(BMP9^-/-)小鼠;2.利用構(gòu)建好的BMP9^-/-和WT小鼠,通過分別給予小鼠10天的對照或酒精液體飼料喂養(yǎng)和一次麥芽糖或酒精灌胃建立慢性+酒精灌胃模型（ALD模型,Gao-Binge模型）;3.通過檢測兩組... 

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【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 前言
2 材料與方法
    2.1 實驗動物
    2.2 實驗試劑與耗材
    2.3 實驗儀器與設(shè)備
    2.4 主要的試劑配置
    2.5 實驗方法
        2.5.1 酒精性肝病的造模以及取材
        2.5.2 小鼠基因組提取及基因型鑒定
        2.5.3 H&E染色
        2.5.4 油紅染色
        2.5.5 小鼠肝組織甘油三酯含量檢測
        2.5.6 免疫組化
        2.5.7 細胞凍存
        2.5.8 細胞復(fù)蘇
        2.5.9 細胞培養(yǎng)
        2.5.10 總RNA提取
        2.5.11 實時熒光定量PCR
        2.5.12 細胞蛋白提取
        2.5.13 蛋白定量
        2.5.14 蛋白質(zhì)免疫印跡
        2.5.15 統(tǒng)計學分析
3 實驗結(jié)果
    3.1 ALD模型中肝臟BMP9 的表達上調(diào)
    3.2 敲除BMP9 可以減少ALD模型中小鼠的ALT和AST水平
    3.3 BMP9 缺失可緩解ALD模型小鼠的肝臟損傷程度
    3.4 BMP9 缺失可緩解ALD模型小鼠的肝臟脂肪變性程度
    3.5 BMP9 缺失可減少ALD模型小鼠的肝臟中性粒細胞浸潤程度
    3.6 BMP9 缺失可減少ALD模型小鼠的肝臟巨噬細胞浸潤與炎癥水平
    3.7 BMP9敲除后可降低酒精誘導(dǎo)肝臟氧化應(yīng)激程度
    3.8 BMP9 可以增加肝臟TLR4的表達
    3.9 BMP9 可以增加巨噬細胞TLR4的表達
    3.10 BMP9在酒精性肝病中的作用的總結(jié)示意圖
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
綜述 酒精性肝病的研究現(xiàn)狀
    參考文獻



本文編號：3692327