目的:非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis,NASH）是全球范圍內(nèi)非常常見(jiàn)的一種慢性肝臟疾病,其發(fā)病機(jī)制以肝臟內(nèi)脂質(zhì)過(guò)量蓄積、肝細(xì)胞脂肪性變性、肝細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化和氧化應(yīng)激及肝內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)為主要特征。哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（Mammalian target of rapamycin,mTOR）為細(xì)胞增殖、分化和凋亡及蛋白合成等的重要調(diào)控因子,也參與NASH病理過(guò)程的發(fā)生發(fā)展。而P18/LAMTOR1的存在與否影響著mTORC1是否能定位于溶酶體膜表面從而被激活繼而發(fā)揮生理病理作用。本研究重點(diǎn)探究特異性敲除肝臟P18/LAMTOR1基因后對(duì)NASH肝組織脂代謝、炎癥狀態(tài)及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路相關(guān)關(guān)鍵信號(hào)因子的影響,深入探討P18/LAMTOR1通過(guò)mTORC1影響NASH的作用機(jī)制。方法:1.P18/LAMTOR1肝臟特異性敲除小鼠的構(gòu)建和檢測(cè):采用背景為C57BL/6的小鼠品系,利用打靶載體同源重組技術(shù),在肝細(xì)胞基因組P18/LAMTOR1外顯子兩側(cè)各插入一個(gè)loxp序列。借助于Cre-Loxp重組酶系統(tǒng)將特定基因敲除,因?yàn)镃re蛋白能識(shí)別lox... 

【文章來(lái)源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Ragulator的組成

Ragulator調(diào)節(jié)mTORC1的表達(dá)[17]

eppendorf 管中，4℃保存。2.方法2.1 P18/LAMTOR1 肝臟特異性敲除小鼠的構(gòu)建和檢測(cè)我們計(jì)劃得到 P18/LAMTOR1 基因肝臟特異性敲除（P18/LAMTOR1LKO，Lliver knockout）的小鼠。在此之前，我們首先設(shè)計(jì)得到 P18/LAMTOR1-floxed 小其策略和基因型檢測(cè)分別如圖 3 和圖 4 所示。P18/LAMTOR1 flox 小鼠品系背景為 C57BL/6，利用打靶載體同源重組在 P18/LAMTOR1 基因的外顯子兩側(cè)各插入一個(gè) loxp 序列。借助于 Cre-loxp酶系統(tǒng)能達(dá)到將特定基因敲除的目的，Cre 蛋白能識(shí)別 loxp 序列并將兩個(gè) lo列中間的基因片段切除。Albumin-Cre 小鼠品系背景為 C57BL/6，原始品系全B6.Cg（Alb-cre）21 Mgn/J，通過(guò)在小鼠基因組插入一段同時(shí)連有 albumin 啟和 Cre 基因的序列，使 Cre 蛋白在肝臟特異性表達(dá)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Genetic and epigenetic variants influencing the development of nonalcoholic fatty liver disease[J]. Yu-Yuan Li.  World Journal of Gastroenterology. 2012(45)
[2]JNKs,insulin resistance and inflammation:A possible link between NAFLD and coronary artery disease[J]. Giovanni Tarantino,Armando Caputi.  World Journal of Gastroenterology. 2011(33)



本文編號(hào)：3559655