本文關(guān)鍵詞：間歇性低氧對(duì)肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝的影響及可能機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景與目的 非酒精性脂肪性肝�。╪onalcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一類除酒精和其他明確因素影響，以肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)度沉積為主要特征的臨床病理綜合征[1-2]。近來(lái)有文獻(xiàn)報(bào)道，睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（sleepuapnea-hypopnea syndrome，SAHS）患者肝細(xì)胞內(nèi)有異常的脂質(zhì)沉積，認(rèn)為慢性睡眠呼吸暫停綜合征所致的間歇性低氧（intermenthypoxia，IH）可以誘發(fā)肝細(xì)胞脂質(zhì)異常代謝[3]，目前有關(guān)間歇性低氧與肝細(xì)胞脂代謝之間的關(guān)系鮮見(jiàn)研究報(bào)道�；钚匝酰╮eactive oxygenspecies，ROS)、低氧誘導(dǎo)因子（hypoxia inducible factors,HIFs)是調(diào)控哺乳動(dòng)物適應(yīng)低氧環(huán)境的重要因子，脂肪分化相關(guān)蛋白（adiposedifferentiation-related protein，adipophilin ADFP）、固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白（sterol regulatory element binding protein, SREBP）-1c、脂肪酸合成酶（fatty acid synthase, FAS）是調(diào)節(jié)肝細(xì)胞脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)和合成的關(guān)鍵分子。本實(shí)驗(yàn)擬用三氣培養(yǎng)箱、人正常肝細(xì)胞（L02）、肝癌細(xì)胞（HepG2）建立間歇性低氧細(xì)胞模型，探討間歇性低氧對(duì)肝細(xì)胞脂代謝及相關(guān)分子的影響，旨在為治療和預(yù)防NAFLD提供新的理論依據(jù)。方法 1、實(shí)驗(yàn)分組：對(duì)照組（21%O2）、實(shí)驗(yàn)組（間歇性低氧組） 2、建立間歇性低氧細(xì)胞模型：在三氣培養(yǎng)箱中用不同氧濃度（1%02、2%02、3%02、21%02）培養(yǎng)人肝L02細(xì)胞和HepG2細(xì)胞持續(xù)8h/d，相繼處理1、2、3、4、5、6d，，顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，MTT方法檢測(cè)細(xì)胞活力，甘油三酯試劑盒測(cè)定細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量；油紅O染色觀察肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積情況。 3、western-blot方法檢測(cè)HIF-1α、HIF-2α、ADFP、SREBP-1c、FAS在肝細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。 4、活性氧檢測(cè)試劑盒檢測(cè)ROS在L02、HepG2細(xì)胞內(nèi)含量的變化。結(jié)果第一部分間歇性低氧誘導(dǎo)肝細(xì)胞脂質(zhì)異常沉積 1、低氧濃度的篩選：MTT方法檢測(cè)1%02、2%02、3%02、21%02對(duì)HepG2、L02細(xì)胞存活率的影響，結(jié)果示：經(jīng)上述干預(yù)，1%02條件下，6d后細(xì)胞存活率小于50%，2%02、3%02條件下6d后的細(xì)胞存活率約100%，根據(jù)相關(guān)參考文獻(xiàn)[19,15]，選擇2%02、3%02進(jìn)行后續(xù)篩選。 2、間歇性低氧時(shí)間點(diǎn)篩選：甘油三酯試劑盒檢測(cè)2%02、3%02對(duì)肝細(xì)胞內(nèi)TG的影響，結(jié)果示：2%02、3%02低氧處理組隨時(shí)間延長(zhǎng)，各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞內(nèi)TG含量逐漸增加，至第5d達(dá)高峰；相同對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)2%02低氧組肝細(xì)胞內(nèi)TG含量較3%02低氧組明顯升高（L02：78.7±2.73vs56.2±1.73， t=13.92, p0.05; HepG2:96.4±3.67vs88.37±2.36,t=3.68, p0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此選用2%02為最佳低氧濃度，1、2、3、4、5d為低氧處理時(shí)間。 3、肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)檢測(cè) （1）隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)照組肝細(xì)胞TG含量無(wú)明顯變化（FL02=0.6，P=0.670.05; FHepG2=0.82，P=0.530.05），經(jīng)2%02間歇性低氧干擾后，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)TG含量逐漸增多，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（FL02=61.83，P0.01；FHepG2=104.19，P0.01）。 （2）油紅O染色：與對(duì)照組相比較，經(jīng)間歇性低氧處理后L02和HepG2細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)橘紅色脂滴隨時(shí)間延長(zhǎng)增多并出現(xiàn)融合現(xiàn)象。第二部分間歇性低氧對(duì)肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝影響的可能機(jī)制 1、肝細(xì)胞內(nèi)HIF-1α、HIF-2α的蛋白表達(dá)變化 經(jīng)2%02持續(xù)干擾8h/d，分別依次處理1、2、3、4、5d后，HIF-1α、HIF-2α在第1d表達(dá)量較對(duì)照組明顯增多（P0.05），隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)HIF-1α的表達(dá)量逐漸增多（FL02=371.19, FHepG2=150.84,P0.05），HIF-2α的表達(dá)卻逐漸下降，至低氧干預(yù)第4天低于對(duì)照組水平（tL02=3.18, tHepG2=2.54，P0.05）。 2、 L02和HepG2細(xì)胞中ROS的變化 實(shí)驗(yàn)組L02和HepG2細(xì)胞內(nèi)的ROS含量較對(duì)照組增多（tL02=22.06,tHepG2=7.2, P0.05）并呈時(shí)間依賴性增多（FL02=1021.84，F(xiàn)HepG2=49.89，P0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3、肝細(xì)胞內(nèi)SREBP-1c、FAS、ADFP分子的表達(dá) 與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組第2d，SREBP-1c、FAS和ADFP蛋白表達(dá)開(kāi)始升高（L02:tSREBP-1c=5.83, tFAS=9.84,tADFP=19.99, P0.05;HepG2:tSREBP-1c=8.4,tFAS=9.18, tADFP=5.46,P0.05），隨著時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)量逐漸增多，（FL02,SREBP-1c=204.49, FL02,FAS=38.2, FL02,ADFP=154.31, P0.05;FHepG2,SREBP-1c=107.35, FHepG2,FAS=279.71, FHepG2,ADFP.=352.06, P0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 1、間歇性低氧可以誘導(dǎo)L02和HepG2細(xì)胞發(fā)生脂質(zhì)異常沉積 2、間歇性低氧誘導(dǎo)產(chǎn)生的ROS可能通過(guò)調(diào)節(jié)低氧誘導(dǎo)因子和脂肪分化相關(guān)蛋白的表達(dá)，影響HIF-1α-SREBP-1c-FAS和ADFP途徑導(dǎo)致肝細(xì)胞脂代謝異常，HIF-2α可能參與間歇性低氧誘導(dǎo)肝細(xì)胞脂變的早期事件。 3、活性氧和低氧誘導(dǎo)因子有可能成為研究非酒精性脂肪性肝病的新靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：間歇性低氧 活性氧 肝細(xì)胞脂變 低氧誘導(dǎo)因子
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R575.5
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-7
• 摘要7-11
• ABSTRACT11-16
• 前言16-18
• 第一部分 間歇性低氧對(duì)肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝的影響18-29
• 前言18
• 1 材料和方法18-22
• 2 結(jié)果22-25
• 3 討論25-26
• 4 小結(jié)26-27
• 參考文獻(xiàn)27-29
• 第二部分 間歇低氧對(duì)肝細(xì)胞脂代謝影響的可能機(jī)制29-46
• 前言29-30
• 1 材料和方法30-36
• 2 結(jié)果36-41
• 3 討論41-44
• 參考文獻(xiàn)44-46
• 全文總結(jié)46-47
• 文獻(xiàn)綜述47-54
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 致謝54-55
• 攻讀碩士學(xué)位期間完成的論文55-56

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 高愛(ài)濱;肖謙;;PPARα與非酒精性脂肪肝[J];國(guó)際消化病雜志;2007年01期

2 曹潔;沈薇;;非酒精性脂肪性肝病與慢性間歇性缺氧研究進(jìn)展[J];實(shí)用肝臟病雜志;2012年04期

3 陳尉華;徐中南;陸倫根;曾民德;劉梅;茅益民;曹愛(ài)平;夏春光;房靜遠(yuǎn);;異甘草酸鎂對(duì)培養(yǎng)肝細(xì)胞增殖影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];肝臟;2006年01期

  本文關(guān)鍵詞：間歇性低氧對(duì)肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝的影響及可能機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：354216