目的:以乙型肝炎病毒（HBV）P基因?yàn)榘悬c(diǎn),構(gòu)建表達(dá)小干擾RNA（siRNA）的真核表達(dá)載體,體外觀察針對(duì)P基因的siRNA在HepG2.2.15對(duì)HBV轉(zhuǎn)錄和翻譯的影響。方法:將構(gòu)建的五個(gè)psiRNA-H1真核表達(dá)質(zhì)粒psiRNA0, psiRNA1, psiRNA2 psiRNA3,psiRNA4瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞,用半定量RT-PCR對(duì)HBV RNA（HBsAg-mRNA,HBeAg-mRNA和HBxAg-mRNA）進(jìn)行檢測,ELISA對(duì)細(xì)胞上清的HBsAg, HBeAg進(jìn)行檢測,用Western Blot檢測X蛋白的表達(dá)。結(jié)果:酶切鑒定和堿基測序證明,成功構(gòu)建了針對(duì)P基因不同位點(diǎn)的真核表達(dá)載體分別命名為psiRNA0, psiRNA1, psiRNA2 psiRNA3,psiRNA4。通過不同的檢測方法,結(jié)果證明針對(duì)P基因的siRNA能下調(diào)HBVS基因,C基因和X基因表達(dá),其中psiRNA1, psiRNA2對(duì)S基因的抑制明顯強(qiáng)于psiRNA3,psiRNA4。psiRNA3,psiRNA4對(duì)C基因的抑制明顯強(qiáng)于psiRNA1, psiRNA2,在所構(gòu)建的psiR... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

3真核表達(dá)質(zhì)粒用于siRNA試驗(yàn)的


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