目的:本實驗中利用ELISA、MTT和Western Blotting等實驗檢測的方法,探究乙醛刺激肝星狀細胞活化過程中TGF-β信號通路相關的機制,并通過刺激肝星狀細胞活化的方法來觀察TGF-β信號通路的功能及效應。首先,乙醛刺激肝星狀細胞株并設置不同的刺激時間,可通過MTT法來檢測活化肝星狀細胞的增殖水平;通過ELISA法測定肝星狀細胞內纖維粘連素FN以及膠原蛋白I含量,證明乙醛能有效得刺激肝星狀細胞株的活化,并比較不同刺激時間的差異。接著采用SB-431542特異性阻斷TGF-β信號通路結合乙醛刺激HSC細胞,Western blotting檢測HSC內ZEB1、α-SMA、Smad3和p-Smad3-S425的表達,以探究TGF-β信號通路相關機制。方法:①將細胞株分組為:（1）正常培養(yǎng)12小時,（2）正常培養(yǎng)24小時,（3）正常培養(yǎng)36小時,（4）TGF-β阻斷正常培養(yǎng)24小時,（5）TGF-β阻斷乙醛24小時刺激培養(yǎng),（6）乙醛12小時刺激培養(yǎng),（7）乙醛24小時刺激培養(yǎng),（8）乙醛36小時刺激培養(yǎng)。培養(yǎng)相應組的細胞到細胞融合度為70%至80%時,用胎牛血清含量為0.4%的... 

【文章來源】：西南醫(yī)科大學四川省

【文章頁數】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

SB-431542處理大鼠肝星狀細胞12~36h后的生長活性Fig1ThegrowthactivitiesofrathepaticstellatecellsweretreatedwithSB-431542for12~36h.

圖 2 SB-431542 處理后不同組別大鼠（Rat）肝星狀細胞 12~36h 后的 TIMP Ⅰ和 FN 表達改變；A 為 SB-431542 阻斷作用下 12~36h 后 TIMP Ⅰ表達的比較；B為 SB-431542 阻斷作用下 12~36h 后 FN 表達的比較Fig 2 TIMP Ⅰa nd FN expressive changs of rat hepatic stellate cells were treatedwith SB-431542 for 12~36h; A TIMP Ⅰ expression of hepatic stellate cells wretreated with SB-431542 for 12~36h; B FN expression of hepatic stellate cells wretreated with SB-431542 for 12~36h.

HSC 經阻斷劑預處理后再分組刺激后提取細胞總蛋白，然g 為各組上樣量標準與預染蛋白 Marker 一起進行 SDS-PAGE分離，為了避免樣品擴散加樣速度要快，可在空白的孔中加樣品緩沖液已避免邊緣效應。跑 5%濃縮膠電壓為 80V，跑膠電壓為 120V，電泳至溴酚藍前沿距凝膠底部 1cm 左右，為 2 至 3 小時左右。將分離膠取下后，用固定液（10%甲醇、、10%乙酸）固定 1 小時后，再用考馬斯亮藍 R-250 染色液分鐘，之后與搖床上加入洗滌液（50%甲醇，50%蒸餾水）漂最后就得到了電泳圖譜，結果見圖 3。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3519498