目的了解乙型肝炎病毒（HBV）感染與肝細胞癌（HCC）的關系,探討乙型肝炎病毒（HBV）在肝細胞染色體上的整合規(guī)律及其在肝癌形成中的作用,了解肝細胞癌的發(fā)生機制。應用HBV-Alu-PCR方法檢測肝細胞癌（HCC）中HBVDNA整合。方法提取乙肝相關性肝癌組織標本中的DNA為模板,設計HBV的亞基因片段X、C、S的引物以檢測其中的HBVDNA,這個產(chǎn)物包括游離形式的和整合形式的HBVDNA;然后再設計HBV的上游序列和人類基因組Alu重復序列為引物,設計的引物中引入U堿基,應用巢式PCR的原理,利用降落PCR技術,使用高度敏感的HBV-Alu-PCR方法擴增出整合形式的HBV基因片段及其側翼的人基因組DNA片段,建立克隆整合的HBVDNA及其相鄰的細胞基因序列的PCR技術。PCR產(chǎn)物送生物公司測序,所獲結果經(jīng)美國國家生物技術信息中心（national center forbiotechnology information NCBI）BLAST及MapViewer檢索確定HBV整合在染色體上的精確位置。結果24份例HBsAg陽性的肝癌組織中,通過HBV-PCR方法幾乎均能檢測到HBV的X... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學安徽省

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

聚合酶鏈反應原理及過程

(l)原理利用巢式PCR的原理，以Alu一PCR為基礎，應用人類Alu序列和HBV序列的特殊引物來擴增病毒和宿主的結合位點【’9]。擴增策略采用改良的套式PcR技術，見圖3，是在套式PCR的基礎上加以改進，先設定一個HBV序列的引物 HBVI和另一個細胞Alu序列的引物作為外側引物，同時又設計一個HBV:引物和Tag引物作為內側引物，在此內側引物的內側還設計一個內內側引物HBv3和Tag作為第3對引物，進行半套式擴增。為了避免擴增Ahi重復序列之間的DNA片段，引物中引入dUTPS。引物如表2。

HBv一lu-PcR產(chǎn)物測序序列HRs2743在人類染色體上的定位(Pubmed)

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3491762