研究目的:探究CD24分子在小鼠膽總管結(jié)扎（BDL）模型所模擬的膽汁淤積性肝纖維化疾病中的作用及其相關(guān)分子機制。研究內(nèi)容與方法:一、觀察CD24分子在小鼠BDL模型所致肝纖維化中的作用。分別構(gòu)建野生型（WT）小鼠與CD24敲除(CD24^-/-)小鼠的BDL模型與假手術(shù)組（Sham）,在造模后第7天處死。H&E染色觀察肝組織損傷變化與炎癥狀態(tài);血清學谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）顯示肝功能變化;天狼猩紅（Sirius Red）染色顯示肝組織纖維化程度;Western-blot檢測肝組織中CD24與α-SMA的蛋白水平表達變化,Real-time PCR檢測肝組織中纖維化相關(guān)指標以及CD24的mRNA表達變化。二、解析CD24分子在小鼠BDL模型肝臟中對巨噬細胞的調(diào)節(jié)作用BDL造模后第7天,使用免疫熒光檢測肝組織中巨噬細胞與纖維化關(guān)系;利用流式細胞術(shù)分析不同基因型小鼠造模后肝臟中定居型巨噬細胞(CD11bⁱntnt F4/80^hi)、募集型巨噬細胞(CD11b^hiF4/80^... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

CD24-/-小鼠BDL誘導的肝纖維化程度更為嚴重Fig1-2BDL-inducedhepaticfibrosiswasaggravatedafterCD24molecularknockout注釋：WT與CD24-/-小鼠BDL造模后第7天，A：H&E染色觀察肝組織病理形態(tài)改變，箭頭表示匯管區(qū)增生與炎性細胞增多，圖片標尺為100μm；B：血清學檢測ALT、AST的表達水平（n=10）；C：SiriusRed染色觀察肝纖維化程度

天津醫(yī)科大學碩士學位論文2.2 結(jié)果2.2.1 CD24 敲除后小鼠 BDL 模型肝纖維化加重與巨噬細胞有關(guān)已經(jīng)有大量研究表明，肝內(nèi)巨噬細胞在肝纖維化的形成中具有重要作用。我們的前期實驗結(jié)果證實了在急性肝損傷中 CD24 分子對巨噬細胞有調(diào)節(jié)作用。因此，結(jié)合第一部分實驗，我們推測是否在小鼠 BDL 模型中，CD24 敲除后肝纖維化加重也與巨噬細胞有關(guān)。流式結(jié)果表明，巨噬細胞表達 CD24（圖 2-1，A）。通過免疫熒光染色我們發(fā)現(xiàn)，造模后，在星狀細胞活化指標 α-SMA 升高的同時，F(xiàn)4/80 的表達也顯著升高，并且高表達 F4/80 的部分集中分布在表達 α-SMA 組織的位置（圖 2-1，B），說明巨噬細胞與肝纖維化的形成高度相關(guān)。此外，CD24分子敲除后，小鼠 BDL 模型 α-SMA 與 F4/80 的表達更為明顯，但兩種基因型假手術(shù)組沒有明顯差別（圖 2-1，B，C）說明 CD24 對小鼠 BDL 模型所致肝纖維化的調(diào)節(jié)與巨噬細胞相關(guān)。

26圖2-2 CD24-/-小鼠BDL模型肝臟中CD11bhiF4/80intLy6Clo巨噬細胞增多更為明顯Fig 2-2 The increasing of CD11bhiF4/80intLy6Clomacrophages in CD24-/-mice liverwas more significant after BDL surgery注釋：WT 與 CD24-/-小鼠 BDL 手術(shù)后第 7 天，小鼠肝臟中：A.排除中性粒細胞（CD45+Ly6G+）后， CD11bintF4/80hi與 CD11bhiF4/80int巨噬細胞的分布與比例的代表性流式圖。B.對于圖 A 中各群細胞的比例以及各群細胞在每克肝臟中的絕對數(shù)統(tǒng)計。（n=8） C. CD11bhiF4/80int中各細胞亞群分布與比例的代表性流式圖。D.對于圖 C 中各群細胞的比例以及各群細胞在每克肝臟中的絕對數(shù)進行統(tǒng)計。（n=8）*P<0.05Note：On day 7 after WT and CD24-/-mouse BDL surgery: A. Representative Flowgraph of the distribution and proportion of F4/80hiCD11bintand F4/80intCD11bhimacrophages after the exclusion of neutrophils(CD45+Ly6G+). B. For the proportion

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Pathogenesis and clinical spectrum of primary sclerosing cholangitis[J]. Neelam G Gidwaney,Swati Pawa,Kiron M Das.  World Journal of Gastroenterology. 2017(14)
[2]Genetic epidemiology of primary sclerosing cholangitis[J]. Tom H Karlsen,Erik Schrumpf,Kirsten Muri Boberg.  World Journal of Gastroenterology. 2007(41)



本文編號：3376846