目的：觀察HMGB1-Abox高表達(dá)對(duì)腸上皮細(xì)胞株SW480和單核細(xì)胞株THP-1中LPS/TLR4的影響，為以HMGB1-Abox為靶點(diǎn)治療IBD提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：㈠LPS對(duì)SW480細(xì)胞HMGB1表達(dá)的影響實(shí)驗(yàn)分組如下：①對(duì)照組：SW480+0ng/ml LPS；②實(shí)驗(yàn)組1：SW480+100ng/ml LPS；③實(shí)驗(yàn)組2：SW480+1000ng/ml LPS；④實(shí)驗(yàn)組3：SW480+10000ng/ml LPS；培養(yǎng)SW480細(xì)胞至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，給予不同濃度LPS分別作用12h、24h收集細(xì)胞檢測(cè)HMGB1的表達(dá)（重復(fù)3次）。㈡構(gòu)建和鑒定HMGB1-Abox高表達(dá)細(xì)胞株⑴HMGB1-Abox重組真核質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定①在GeneBank中查找人HMGB1-A box基因序列，由公司基因合成。②將合成的HMGB1-A box基因插入到pEGFP-N1載體，構(gòu)建重組質(zhì)粒。擴(kuò)增及提取重組質(zhì)粒，鑒定方法采用酶切和測(cè)序。⑵HMGB1-Abox重組真核質(zhì)粒在SW480細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)采用陽(yáng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將pEGFP-N1-HMGB1-A box轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞，分別觀察有無(wú)綠色熒光及熒光... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 材料與方法
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 質(zhì)粒
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 主要溶液配制
    2.2 方法
        2.2.1 篩選 HMGB1-A box 低表達(dá)腸上皮細(xì)胞株
        2.2.2 構(gòu)建和鑒定 HMGB1-A box 高表達(dá)腸上皮細(xì)胞株
        2.2.3 HMGB1-A box 高表達(dá)及 EP 對(duì) SW480 細(xì)胞 HMGB1、TLR4、MyD88 及 pNF-κB p65 及促炎因子分泌的影響
        2.2.4 EP 及 HMGB1-A box 高表達(dá) SW480 細(xì)胞與 THP-1 細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì)THP-1 細(xì)胞 HMGB1、LPS/TLR4 信號(hào)通路及促炎因子分泌的影響
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 篩選 HMGB1-A box 低表達(dá)腸上皮細(xì)胞株
    3.2 LPS 對(duì) SW480 細(xì)胞內(nèi) HMGB1 mRNA 表達(dá)的影響
    3.3 構(gòu)建 HMGB1-A box 高表達(dá) SW480 細(xì)胞
        3.3.1 重組 pEGFP-N1-HMGB1-A box 質(zhì)粒的鑒定
        3.3.2 重組 HMGB1-Abox 真核質(zhì)粒在 SW480 細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)
    3.4 EP 和 HMGB1-A box 高表達(dá)對(duì) SW480 細(xì)胞 HMGB1 、TLR4/LPS 信號(hào)通路及促炎因子分泌的影響
        3.4.1 EP 和 HMGB1-A box 高表達(dá)對(duì) SW480 細(xì)胞內(nèi) HMGB1 mRNA 及蛋白表達(dá)的影響
        3.4.2 EP 和 HMGB1-Abox 高表達(dá)對(duì) SW480 細(xì)胞內(nèi) TLR4 mRNA 及蛋白表達(dá)的影響
        3.4.3 EP 和 HMGB1-A box 高表達(dá)對(duì) SW480 細(xì)胞內(nèi) MyD88 mRNA 及蛋白表達(dá)的影響
        3.4.4 EP和HMGB1-Abox高表達(dá)對(duì)SW480細(xì)胞內(nèi)pNF-κB p65蛋白表達(dá)的影響
        3.4.5 EP 和 HMGB1-Abox 高表達(dá)對(duì) SW480 細(xì)胞分泌 HMGB1、IL-1β、TNF-α和 IL-6 的影響
    3.5 EP 及 A-box 高表達(dá) SW480 細(xì)胞與 THP-1 細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì) THP-1 細(xì)胞內(nèi)HMGB1、TLR4/LPS 信號(hào)通路及促炎因子分泌的影響
        3.5.1 EP 及 A-box 高表達(dá) SW480 細(xì)胞與 THP-1 細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì) THP-1 細(xì)胞內(nèi) HMGB1 mRNA 及蛋白表達(dá)的影響
        3.5.2 EP 及 A-box 高表達(dá) SW480 細(xì)胞與 THP-1 細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì) THP-1 細(xì)胞內(nèi) TLR4 mRNA 及蛋白表達(dá)的影響
        3.5.3 EP 及 A-box 高表達(dá) SW480 細(xì)胞與 THP-1 細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì) THP-1 細(xì)胞內(nèi) MyD88 mRNA 及蛋白表達(dá)的影響
        3.5.4 EP 及 A-box 高表達(dá) SW480 細(xì)胞與 THP-1 細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì) THP-1 細(xì)胞 pNF-κB p65 蛋白表達(dá)的影響
        3.5.5 EP 及 A-box 高表達(dá) SW480 細(xì)胞與 THP-1 細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì) THP-1 細(xì)胞分泌 HMGB1、IL-1β、TNF-α和 IL-6 的影響
第4章 討論
    4.1 LPS 對(duì) SW480 細(xì)胞及 THP-1 細(xì)胞內(nèi) TLR4 信號(hào)通路的影響
    4.2 LPS 對(duì) SW480 細(xì)胞及 THP-1 細(xì)胞 HMGB1 表達(dá)和分泌的影響
    4.3 HMGB1-A box 高表達(dá)對(duì) SW480 細(xì)胞及 THP-1 細(xì)胞內(nèi) LPS/TLR4 信號(hào)通路和促炎因子的影響
    4.4 EP 對(duì) SW480 細(xì)胞及 THP-1 細(xì)胞內(nèi) LPS/TLR4 信號(hào)通路和促炎因子的影響
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3361093