目的酒精性肝病（Alcohol liver disease,ALD）是一類影響人類健康的全球性肝臟疾病,它包括酒精性肝炎（Alcohol hepatitis,AH）,酒精性脂肪肝（Alcohol fatty liver,AFL）,酒精性肝纖維化和肝硬化。大量飲酒是導(dǎo)致酒精性肝病的最主要原因。酒精性脂肪肝是酒精性肝病的早期階段,它伴隨著肝細(xì)胞大量的脂質(zhì)積累以及肝細(xì)胞的氧化應(yīng)激。因此有效的逆轉(zhuǎn)酒精性脂肪肝是防止酒精性肝病惡化的重要措施。目前對(duì)于酒精性脂肪肝仍缺少有效的治療藥物和方法,闡明酒精性脂肪肝形成的相關(guān)分子機(jī)制對(duì)減少酒精性脂肪肝和酒精性肝病的發(fā)生具有重要意義。MicroRNA-203（miR-203）作為腫瘤抑制因子,它能夠抑制肝細(xì)胞的增殖和遷移進(jìn)而抑制肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的發(fā)生和發(fā)展。本課題組前期通過收集酒精肝病人和正常人血液提取RNA高通量篩查對(duì)比發(fā)現(xiàn),miR-203表達(dá)在酒精肝病人中降低,但其在酒精性脂肪肝中的作用和機(jī)制尚不清楚且亟待研究。Lipin1是Lipin家族的重要一員,它具有Lipin家族共有的調(diào)控功能。一方面它能夠促進(jìn)... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
英文摘要
1.引言
2.實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 動(dòng)物
    2.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
    2.3 藥品與試劑
    2.4 儀器與設(shè)備
    2.5 溶液和試劑的配制
    2.6 圖像分析軟件
3.實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 酒精性脂肪肝模型建立
    3.2 肝臟組織 HE 染色
    3.3 肝臟組織油紅染色
    3.4 肝臟免疫組化
    3.5 慢病毒過表達(dá)miR-203載體構(gòu)造及體內(nèi)感染
    3.6 血清 ALT，AST，TG，TCH 測(cè)定
    3.7 細(xì)胞培養(yǎng)
    3.8 MTT發(fā)測(cè)定細(xì)胞增殖
    3.9 細(xì)胞內(nèi)油紅染色
    3.10 細(xì)胞免疫熒光
    3.11 AML-12細(xì)胞總蛋白提取
    3.12 細(xì)胞核蛋白提取
    3.13 Westernblot
    3.14 實(shí)時(shí)定量PCR
    3.15 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 miR-203在酒精性脂肪肝模型中的表達(dá)
        4.1.1 酒精性脂肪肝模型的建立和病理變化
        4.1.2 miR-203在小鼠酒精性肝臟組織和酒精刺激的 AML-12 細(xì)胞中的表達(dá)
    4.2 體內(nèi)慢病毒載體過表達(dá)miR-203對(duì)小鼠肝臟脂質(zhì)代謝的影響
        4.2.1 體內(nèi)過表達(dá)miR-203模型的建立和驗(yàn)證
        4.2.2 過表達(dá)miR-203對(duì)小鼠肝臟脂質(zhì)代謝的影響
    4.3 體外過表達(dá)miR-203對(duì)AML-12脂質(zhì)代謝的影響
        4.3.1 體外過表達(dá)miR-203模型的建立及驗(yàn)證
        4.3.2 過表達(dá) mi R-203 對(duì) AML-12 細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝的影響
    4.4 miR-203能夠靶向調(diào)控 LPIN1
    4.5 Lipin1在酒精性脂肪肝中的表達(dá)
        4.5.1 Lipin1在酒精性脂肪肝小鼠肝臟中的表達(dá)
        4.5.2 Lipin1在酒精刺激的AML-12細(xì)胞中的表達(dá)
    4.6 沉默Lipin1對(duì)AML-12細(xì)胞脂質(zhì)代謝的影響
        4.6.1 si-RNA沉默AML-12細(xì)胞中內(nèi)源性Lipin1的表達(dá)
        4.6.2 沉默Lipin1抑制了肝細(xì)胞的脂質(zhì)積累
    4.7 miR-203對(duì)Lipin1亞細(xì)胞定位的調(diào)節(jié)作用
5.討論
6.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Adult mouse model of early hepatocellular carcinoma promoted by alcoholic liver disease[J]. Aditya Ambade,Abhishek Satishchandran,Benedek Gyongyosi,Patrick Lowe,Gyongyi Szabo.  World Journal of Gastroenterology. 2016(16)



本文編號(hào)：3357384