發(fā)布時(shí)間：2021-08-17 04:37

　　背景HBV感染是一個(gè)嚴(yán)重威脅到人類健康的全球性問(wèn)題,HBV是引起急慢性肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌的重要致病因素�？共《局委熓悄壳奥砸倚透窝椎年P(guān)鍵性治療措施,現(xiàn)有的抗病毒藥物干擾素-α和核苷類似物的療效有限,基因治療日益成為目前的研究熱點(diǎn)之一�；蛑委煹年P(guān)鍵在于選擇良好的轉(zhuǎn)基因載體、合適的目的基因和實(shí)現(xiàn)目的基因的可控性表達(dá)。基因工程中應(yīng)用最多的載體是真核細(xì)胞表達(dá)載體,如病毒類載體,它們能將目的基因?qū)胨拗骷?xì)胞并穩(wěn)定表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)選擇真核表達(dá)載體pEGFP-C1,為在細(xì)胞水平和體內(nèi)觀察其抑制HBV復(fù)制效果打下基礎(chǔ),同時(shí)選擇HBV core啟動(dòng)子（core promoter, cp）作為目的基因（因?yàn)樵搯?dòng)子指導(dǎo)HBV pgRNA和pc mRNA轉(zhuǎn)錄的正確啟動(dòng)）,構(gòu)建HBV cp的反義真核表達(dá)載體,該載體可以轉(zhuǎn)錄出cp的反義RNA,反義RNA與pgRNA中的cp部分結(jié)合有可能使pg RNA逆轉(zhuǎn)錄為負(fù)鏈DNA受阻,同時(shí)可能導(dǎo)致pg RNA翻譯蛋白的水平下降,從而使HBV合成和包裝下降,最終有可能使HBV的復(fù)制長(zhǎng)期受到抑制。目的HBV核心區(qū)啟動(dòng)子的克隆及其反義真核表達(dá)載體的構(gòu)建,為乙型肝炎的... 

【文章來(lái)源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

真核表達(dá)載體pEGFP一CI結(jié)構(gòu)圖

圖2HBV核心區(qū)啟動(dòng)子PCR擴(kuò)增產(chǎn)物1:MarkerDL20002和3均為PCR產(chǎn)物NA聚合酶PCR擴(kuò)增HBV核心區(qū)啟動(dòng)子A聚合酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到的產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠現(xiàn)在225bp處出現(xiàn)一清晰的特異性條帶，表明與HBv相同，見(jiàn)圖3。

圖3HBV核心區(qū)啟動(dòng)子PCR擴(kuò)增產(chǎn)物1和2均為PCR產(chǎn)物3:MarkerDL2000粒pEGFp一Cl一cp的鑒定粒pEGFp一CI一ep的pCR鑒定重組質(zhì)粒pEGFP一Cl一cP和空質(zhì)粒pEGFP一CI為模板進(jìn)脂糖凝膠電泳，以重組質(zhì)粒pEGFP一Cl一cP為模板擴(kuò)一增粒pEGFP一Cl為模板擴(kuò)一增無(wú)此條帶，結(jié)果見(jiàn)圖4。


本文編號(hào)：3347072